|
|
|
|
Диплом: Биохимические показатели крови человека при сальмонеллезной интоксикации
Диплом: Биохимические показатели крови человека при сальмонеллезной интоксикации
Реферат.
Дипломная работа на тему: «Биохимические показатели крови человека при
сальмонеллезной интоксикации» содержит 46 страниц печатного текста,
таблиц, 8 рисунков, 59 использованных источников литературы, из них 10
иностранных.
Перечень ключевых слов: сальмонеллез, перекисное окисление липидов,
циркулирующие иммунные комплексы, каталаза, молекулы средней массы,
сывороточный альбумин, эндогенная интоксикация.
Объект исследования: сыворотка крови практически здоровых людей и больных
сальмонеллезом г. Пензы.
Практическое применение: в здравоохранении.
Список сокращений.
ПОЛ – перекисное окисление липидов;
ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы;
ЧСА – человеческий сывороточный альбумин;
МДА – малоновый диальдегид;
ПЭГ – полиэтиленгликоль;
АОС – антиокислительная способность;
АТ – антитело;
АГ – антиген;
ИК – иммунный комплекс;
ЛПС – липополисахаридный комплекс;
МСМ – молекулы средней массы;
ТБК – тиобарбитуровая кислота;
ЭКА – эффективная концентрация альбумина;
ОКА – общая концентрация альбумина;
ТХУ – трихлоруксусная кислота;
ЦНС – центральная нервная система;
ц-АМФ – циклический аденозинмонофосфат;
АФК – активные формы кислорода;
LOOH, HOOH – гидроперекиси;
СОД – супероксиддисмутаза.
Содержание.
Введение.......................... 1. Обзор литературы ..................... 1.1. Биохимическая характеристика интоксикации при сальмонеллезной инфекции................ 1.2. Молекулярные механизмы развития эндогенной интоксикации при сальмонеллезе............. 1.3. Показатели уровня эндогенной интоксикации организма при сальмонеллезе............. 2. Материалы и методы исследования........... 2.1. Материалы исследования............... 2.2. Методы исследования................ 3. Результаты и обсуждение................ 3.1. Определение показателей уровня интоксикации в сыворотке крови практически здоровых людей.... 3.2. Определение показателей уровня интоксикации в сыворотке крови больных сальмонеллезом........ Список использованных источников............. Выводы.......................... Приложения........................ | 5-6 7-19 7-11 11-14 14-19 20-25 20 20-25 26-34 26-27 28-34 35-40 41 42-46 |
Введение
Успехи в борьбе с инфекционными заболеваниями в нашей стране общепризнанны.
Вместе с тем в инфектологии еще остаются проблемы, имеющие серьезное
социально-экономическое значение для всех стран мира. К их числу относятся
острые кишечные инфекционные заболевания [1].
Сальмонеллез – группа острых кишечных инфекционных болезней, вызываемых
бактериями рода Salmonella, характеризующихся значительным полиморфизмом
клинического течения, частым наличием интоксикации, лихорадки, признаков
поражения желудочно-кишечного тракта [2].
Крупные достижения отечественных и зарубежных исследователей, установивших
патогенетическое значение нарушения биологической регуляции при острых
кишечных инфекциях, дали новый импульс в изучении патогенеза сальмонеллеза
[3].
Иммунная система представляет собой сложную многокомпонентную систему из
быстроделящихся и покоящихся клеток. Она является высокочувствительной к
воздействию токсинов бактерий. Это приводит к нарушению иммунорегуляторных
процессов.
Наиболее информативными являются показатели состояний прооксидантно-
антиоксидантного равновесия, которое при усилении действия на организм
токсинов смещается в сторону активизации ПОЛ, уровня холестерина, ЦИК, Ит,
МСМ.
ПОЛ – это фундаментальный универсальный молекулярный механизм, лежащий в
основе устойчивости и адаптационных возможностей организма. В норме ПОЛ
обеспечивает условие для жизненно важных функций клетки, в случае же
интоксикации становится пусковым механизмом патобиохимических изменений в
организме человека.
Целью моей дипломной работы является изучение биохимических показателей
эндотоксикоза в динамике патологического процесса. В задачи исследования
входило:
1. Определение содержания МДА, уровня холестерина, ЦИК, Ит, МСМ и активности
каталазы в группе контроля, которую составили практически здоровые люди.
2. Определение содержания МДА, уровня холестерина, ЦИК, Ит, МСМ и активности
каталазы у больных сальмонеллезом.
3. Исследование изменения изучаемых показателей у больных в зависимости от
степени тяжести заболевания.
1. Обзор литературы
1.1. Биохимическая характеристика интоксикации при
сальмонеллезной инфекции
Сальмонеллезы принадлежат к числу инфекционных заболеваний, весьма широко
распространенных на всех континентах мира. Возбудителем сальмонеллезов
являются микроорганизмы, принадлежащие к роду Salmonella, семейства кишечных
Enterobacteriaceae.
Сальмонеллы – это мелкие бактерии вытянутой формы с закругленными
концами длиной от 1 до 3 и диаметром 0,5-0,8 нм [4].
Сальмонеллез встречается чаще у жителей городов, чем сел, что связывается с
лучшей регистрацией заболеваемости, наличием множественных детских
учреждений, широким употреблением пищевых полуфабрикатов. Заболевание
отмечается круглый год, но максимальное число регистрируется в теплое время
года, что объясняется благоприятными условиями размножения сальмонелл в
пищевых продуктах и реализации инфекции [5].
Таблица 1.1.1.
Статистические данные больных сальмонеллезом г. Пензы.
| Год | Количество больных г. Пензы | На 100 тыс. населения, % | Кол-во больных Пензенской области | На 100 тыс. населения, % | | 1996 | 187 | 34,9 | 362 | 23,1 | | 1997 | 140 | 26,1 | 316 | 20,3 | | 1998 | 230 | 43,0 | 448 | 28,8 |
В возникновении сальмонеллеза ведущую роль играют живые бактерии, гибель
которых в организме больного сопровождается развитием эндотоксинемии. Принято
выделять два вида токсичных продуктов жизнедеятельности микробов-экзотоксии и
эндотоксии. К экзотоксинам отнесены токсичные продукты жизнедеятельности
бактерий, активно (при жизни) секретируемые в окружающую среду, а к
эндотоксинам – те ядовитые для макроорганизма продукты жизнедеятельности,
которые освобождаются только при лизисе микробной клетки [6].
Кроме токсина палочка имеет ряд антигенов клеточной стенки. О-антиген
расположен на поверхности микробной клетки и представляет собой фосфолипидно-
полисахаридный комплекс, включающий 60 % полисахарида, 20-30 % липида и 3-4,5
% гексозамина. Н-антиген определяется жгутиками. Поверхностные антигены
клеточной стенки провоцируют типоспецифический антительный ответ, а глубинные
– видоспецифический [6,7].
При сальмонеллезе развитие и тяжесть симптомов обусловлены интоксикацией и
обезвоживанием. По мнению А.Ф. Билибина интоксикация – явление сложное,
сводящееся к изменению нервнорефлекторной деятельности и гуморальной
регуляции с обменными сдвигами. К.В. Бунин в основу синдрома интоксикации
ставит воздействие токсина на :
1) падение артериального давления, снижение сократительной способности
миокарда;
2) гормональную регуляцию водно-солевого обмена с изменениями биосинтеза
гормонов в коре надпочечников с угнетением процесса их метаболизма;
3) функцию почек (снижение клубочковой фильтрации, повышение канальцевой
реабсорбции воды, снижение концентрации очищения мочевины) [8].
Сальмонеллезная интоксикация возникает как результат патологии первичного
ответа на инфекционный агент вследствие значительных потерь воды и
электролитов с рвотой и жидким стулом. По мере увеличения дефицита воды и
электролитов на первый план выступают симптомы обезвоживания и поражения ЦНС.
Если процесс прогрессирует, обезвоживание нарастает, появляются признаки
недостаточности кровообращения, которые при интоксикации имеют клинику шока.
Частая рвота и понос – первые признаки интоксикации [9].
Обязательным условием развития заболевания являются наличие большого
количества возбудителей и их токсинов, массовое проникновение антигенов в
кровь. Наибольшей токсичностью отличается липид А, вызывающий следующие
основные реакции: активацию лейкоцитов и макрофагов, стимуляцию выброса
эндогенного пирогена, антогониста глюкокортикоидов, интерферона,
интерлейкинов, подавление тканевого дыхания, активацию системы комплемента,
тромбоцитов, факторов свертывания крови другие [10,11], [рис. 1.1.1].
Главной причиной развития шока при сальмонеллезе считается не повреждающее
действие самих микробов или их токсинов, а своеобразный ответ организма на
них. Под токсико-инфекционным шоком следует понимать экстремальное состояние
организма, наступающее в результате действия токсичных субстанций
возбудителей, патогенных иммунных комплексов на органы и ткани организма,
сопровождающееся острым нарушением метаболизма в них [12].
Схематическое изображение липополисахаридов
стенок микробов.
Рис. 1.1.1.
С.А. Степанов с помощью аспирационной биопсии обнаружил в тонкой кишке
больных сальмонеллезом изменение эпителия, острое воспаление слизистой
оболочки, нарушение микроциркуляции и сосудистой проницаемости. К.Х. Ходжаев
в эксперименте на крысах показал, что сальмонеллезная инфекция вызывает
нарушение процесов тканевого дыхания и фосфорилирования. Состояние
поджелудочной железы изучено Белянской Т.А. В острый период болезни отмечено
снижение ферментативной активности панкреатического сока – уровень трипсина
был снижен в 71 % случаев, липазы в 55 %, амилазы – в 66 %.
Таким образом эндотоксин вызывает активацию синтеза, преимущественно
протеолитических ферментов, задержку экструзии секретируемых проэнзимов, что
приводит к секреции и поступлению ферментов в лимфатическое и кровеносное
русло [13,14].
При сальмонеллезе развивается обезвоживание, обусловленное потерей
внеклеточной жидкости, а при тяжелом течении заболевания и части клеточной.
Дегидратация в большинстве случаев имеет изотонический характер, сочетаясь с
развитием сгущения крови, дефицитом электролитов, метаболическим ацидозом в
капиллярной и венозной крови [15], [рис. 1.1.2].
1.2. Молекулярные механизмы развития эндогенной
интоксикации при сальмонеллезе
Явления интоксикации вызывают заболевания, сопровождающиеся повышенным
распадом тканей, усиленными процессами катаболизма, недостаточностью функции
печени и почек, снижением процессов микроциркуляции [16].
В ответ на действие первичного патогена, которым являются эндотоксины,
сальмонелл, в организме развиваются типовые каскадные реакции, что лежит в
основе современной концепции СЭИ.
На Международном симпозиуме в Санкт-Петербурге (1994 г) было дано определение
этого синдрома как клинического синдрома с проявлением симптомов интоксикации
при патологических состояниях неоднородных по этиологии и обуславливающих
накопление в тканях и биологических жидкостях организма продуктов
патологического обмена веществ, метаболитов, деструкции клеточных
и тканевых структур, разрушения белковых молекул [17,18].
Шано В.П. с соавторами подчеркивает, что токсическое влияние
липополисахаридной субстанции эндотоксина проявляется комплексом нарушений,
обусловленных повреждением как циркулирующих клеток в кровотоке, так и
эндотелиоцитов, эозинофилов, нейтрофилов, макрофагов, следствием чего
является выброс в кровоток ряда биологически активных веществ – цитокинов,
интерлейкинов. Главной точкой приложения эндотоксина являются эндотелиальные
клетки, активация их приводит к высвобождению простациклина, выделению
эластазы, токсических метаболитов кислорода, факторов активации тромбоцитов и
комплемента с высвобождением терминального комплекса комплемента, брадикинина
с последующим формированием синдрома повышенной проницаемости капилляров. Это
приводит к тому, что в очаг воспаления начинают входить компоненты крови,
прежде всего фибриноген и тромбоциты. Фибрин способствует агрегации
тромбоцитов, полимеризации фибрина и – возникновению тромбов. Следствием
тромбоза являются нарушения микроциркуляции с последующей гипоксией, что
приводит к дальнейшим повреждениям клеток в очаге воспаления. Метаболическим
результатом этого является изменение аэробного метаболизма клеток на
анаэробный, повышенное продуцирование лактата и протонов, снижение
показателей рН [19].
Среди тканевых (клеточных) медиаторов воспаления важное место занимают
простагландины. Исходными продуктами для биосинтеза простагландинов являются
ненасыщенные жирные кислоты: линолевая, арахидоновая, пентаноевая. Наибольшее
значение имеет в организме арахидоновая кислота, которая содержится в
фосфолипидах клеточных мембран.
Простагландины вызывают сильное диуретическое и натрийуретическое действие,
оказывают разнообразное действие на желудочно-кишечный тракт. Они могут
стимулировать и тормозить сокращение и секреторную активность тонкой кишки,
тормозят секрецию соляной кислоты слизистой оболочки желудка. Простагландины
вызывают секрецию воды и электролитов в просвет кишки, вызывая диарею,
повышают концентрацию ц-АМФ в слизистой оболочке тонкой кишки, влияют на
прочность и упругость эритроцитарной мембраны [20, 21, 22, 49].
1.3. Показатели уровня эндогенной интоксикации
организма при сальмонеллезе
Анализируя данные литературы за последние десятилетия, можно сказать, что
основными показателями интоксикации при сальмонеллезе являются ПОЛ, уровня
холестерина, ЦИК, ИТ, МСМ и активность каталазы. При развитии интоксикации на
фоне сальмонеллеза происходит активный хемотаксис нейтрофиллов в очаг
воспаления, где они поглощая и переваривая чужеродный агент, изменяют свою
метаболическую активность, характеризующуюся усилением поглощения кислорода,
повышенной утилизацией глюкозы и гиперпродукцией АФК (
) [23, 24].
Перекисное окисление является универсальным механизмом взаимодействия
кислорода со многими органическими субстратами, в том числе с липидами.
Внедрение кислорода в молекулы окисленного субстрата приводит к образованию
реакционно-способных промежуточных продуктов – свободных радикалов,
гидроперекисей, которые в дальнейшем вызывают повреждение других классов
соединений – белков, нуклеиновых кислот, углеводов (рис. 1.3.1).
Метаболизм супероксидного радикала в норме
и при патологии (Владимиров Ю.Я., 1998)
Рис. 1.3.1.
Накопленные к настоящему времени данные литературы позволяют сделать вывод о
том, что свободнорадикальное окисление липидов при сальмонеллезной инфекции
играет определенную патогенетическую роль [25, 50].
Установлено, что при развитии ПОЛ в биомембранах понижается содержание
легкоокисляемых полиненасыщенных жирных кислот и изменяются физико-химические
свойства: микровязкость, текучесть, мембранный потенциал, полярность
внутренних областей мембран. Таким образом, изменяются транспортные свойства
мембраны и активность ферментов [26].
Регуляция свободнорадикального окисления обеспечивается в клетке системой
антиоксидантной защиты. Так, накапливающаяся в процессе ПОЛ перекись водорода
обезвреживается с помощью каталазы, присутствующей во всех тканях организма.
Каталаза (КФ 1.11.1.6.) представляет собой гемсодержащий фермент с
молекулярной массой около 250000 Д, локализованный в пероксисомах клеток
[27].
Митохондриальная каталаза участвует в оксидазном пути окисления,
сопровождающемся запасанием энергии в виде АТФ. Блокирование транспорта
электронов в дыхательной цепи приводит к стимуляции пероксисомального
окисления. При потологиях, связанных с нарушением энергетических процессов,
каталаза пероксисом может выходить из них и участвовать в окислении на
мембранах эндоплазматического ретикулума [28, 53].
В работе Л.Б. Оконенко с соавторами о состоянии антиоксидантной системы
судили по активности СОД, глутатионпероксидазы и каталазы, анализ данных
выявил дефицит антиоксидантов [29, 30].
При инфекционном токсикозе в мембранах эритроцитов резко снижается содержание
общих фосфолипидов, но увеличивается количество НЭЖК и лизофосфотидилхолина,
что косвенно указывает на повышение активности фосфолилаз, которые
избирательно разрушают липиды мембран. Холестерин подвергается как активному,
так и пассивному обмену в мембранах эритроцитов [29]. Фермент
лецитинхолестеролацил трансфераза превращает эфиры холестерина в свободный
холестерин и тем самым регулирует уровень свободного холестерина в плазме,
что способствует проникновению его в мембраны. Следовательно, инактивация
этого фермента в результате гипоксии при эндотоксикозе ведет к повышению
уровня эфиров холестерина в мембранах эритроцитов [31,32].
Наряду с уровнем МДА, активности каталазы и уровня холестерина для
диагностики заболевания и его прогноза имеют значение и другие
неспецифические показатели – ЦИК, Ит, МСМ.
Синтезирующиеся при формировании иммунитета специфические антитела обладают
способностью взаимодействовать с антигенами возбудителей и тем самым вызывать
нейтрализацию патогенных микробов и их токсинов. Эта реакция сопровождается
образованием иммунных комплексов антиген – антитело [33, 34, 54, 55]. При
патологических состояниях образование ИК выходит из под контроля, в
результате чего развивается та или иная болезнь ИК [рис. 1.3.2.].
Патогенетические механизмы болезней иммунных
комплексов (Сура В.В., 1987)
Рис. 1.3.2.
В результате развития эндотоксемии при сальмонеллезе организм длительное
время контактирует с избытком АГ как экзогенного (компоненты микробных
клеток), так и эндогенного (компоненты разрушенных клеток самого организма)
происхождения. Вместе с тем наблюдается угнетение системы комплемента,
ответственного за лизис микробных клеток. В этих условиях значительного
избытка АГ и недостаточности выработки АТ может привести к образованию ИК,
которые способны откладываться в определенных тканях и вызывать острые
воспалительные реакции. При значительных отложениях наблюдаются
функциональные и морфологические повреждения органов и тканей [35].
Связываясь с клеточной мембраной ЦИК вызывают выделение в окружающую среду
протеолитических ферментов и основных пептидов. Эти вещества повреждают
протеогликановые компоненты тканей, действуют на базальную мембрану и
вызывают некроз эндотелиальных клеток [36].
ЦИК наряду с продуктами ПОЛ вызывают нарушение проницаемости мембран, вплоть
до их разрыва, что в конечном итоге может привести к гибели клетки. В
результате появляются различные вещества пентидной природы. Из них наибольший
интерес представляют молекулы средней массы.
Являясь олигопептидами с молекулярной массой 300-5000 Дальтон, они
расцениваются как универсальный критерий эндогенной интоксикации и влияют на
ее уровень и прогноз [37, 38].
МСМ образуются в организме под воздействием повреждающих эндогенных или
экзогенных факторов различного генеза, являются промежуточными продуктами
протеолиза. [39, 57].
Пристальное внимание исследователей к МСМ объясняется высокой биологической
активностью их отдельных фракций, которые ингибируют гликолиз, глюконеогенез,
пентозный цикл, синтез гемоглабина, нуклеиновых кислот, мембранный транспорт,
дагоцитов, эритропоэз, микроциркуляцию, обладают иммунодепрессивным,
цитотоксическим, нейро- и психотропным свойствами. Сейчас, квалификационная
оценка степени тяжести состояния больных при сальмонеллезе немыслима без
определения МСМ [40].
Установлено, что значительная часть циркулирующих в крови СМ не только
растворена в плазме крови, но и связана с альбумином.
Человеческий сывороточный альбулин (ЧСА) – важнейший транспортный белок,
осуществляющий перенос эндогенных метаболитов и ксенобиотиков в плазме крови,
межклеточной жидкости, в лимфе.
Универсальность транспортной функции ЧСА обеспечивается его уникальной
способностью связывать лиганды различной химической природы. Интенсивная
лигандная нагрузка молекул альбулина приводит к изменению их структуры и
связывающей способности. Такие модификационные формы ЧСА обнаруживаются при
патологии [41].
О величине токсического действия вредных веществ можно судить по ЭКА, которая
снижается после того, как токсические вещества займут центры связывания в
молекуле альбулина, что приводит к снижению детоксикационных свойств
организма. Изучение свойств альбулина является важным с точки зрения как
диагностики, так и лечения [42].
2. Материалы и методы исследований
2.1. Материал исследований
Уровень интоксикации оценивался по изменениям в крови больных эффективной и
общей концентраций сывороточного альбулина, малонового диальдегида, как
одного из продуктов ПОЛ, уровня холестерина, ЦИК, МСМ и активности каталазы.
Для всех исследований бралась сыворотка крови. Исследовано 30 больных
сальмонеллезом в возрасте от 17 до 46 лет. Для контроля набиралась группа 51
человека разного пола в возрасте от 20 до 46 лет.
Кровь бралась из локтевой вены, преимущественно натощак в количестве не менее 5
мл. Центрифугируем 1500 об/мин 10 минут. Для выполнения анализов сыворотки
необходимо использовать сразу или заморозить и хранить при t=-20
С.
2.2. Методы исследований
2.2.1. Определение МДА с тиобарбитуровой кислотой
(Конюхова В.С., 1989)
Об изменении интенсивности ПОЛ судим по изменению уровня вторичного продукта
ПОЛ – малонового диальдегида.
Метод основан на том, что при высокой температуре в кислой среде МДА
реагирует с 2-ТБК, образуя окрашенный розовый триметиновый комплекс с
максимумом поглощения при 535 им.
Ход работы: К 0,2 мл сыворотки крови добавить 0,2 мл дистиллированной воды,
1 мл 0,6 % ТБК в ледяной уксусной кислоте. Кипятить 30 минут, охладить и
добавить 1 мл 5№ КОН и 2 мл изопропанола. Центрифугируют при 6000 об/мин 20
минут. Колориметрируют при 535 нм и 580 нм против контроля, содержащего
вместо плазмы воду.
Расчет: 
(мкМоль/л), где Е – оптическое поглащение изопропилового экстракта; 106 –
коэффициент пересчета оптической плотности.
Пример расчета: больной Максимов С., 19 лет
концентрация МДА =  (мкМоль/л).
2.2.2. Определение активности каталазы
(Королюк М.А., 1988)
Метод основан на способности перекиси водорода образовывать с солями
молибдена стойкий окрашенный комплекс.
Ход определения: Реакция запускается добавлением 0,1 мл сыворотки крови к 2
мл 0,03 % раствора перекиси водорода. В холостую пробу вместо сыворотки
вносят 0,1 мл дистиллированной воды. Реакцию останавливают через 10 минут
добавлением 1 мл 4% молибдата аммония. Интенсивность окраски измеряют на
спектрофотометре при длине волны 410 нм против контрольной пробы, в которой
вместо перекиси водорода вносят 2 мл воды.
Расчет:  (мкат/л), где
Е – активность каталазы в мкат/л;
А – оптическая плотность холостой и опытной проб;
V – объем вносимой пробы, 0,1 мл;
t – время инкубации, 600 сек;
К – коэффициент миллимолярной экстинкции перекиси водорода, равный  .
За единицу активности каталазы принимают то количество фермента, которое
участвует в превращении 1 мкат перекиси водорода за 1 секунду при заданных
условиях. Расчет активности каталазы ведут на 1 л сыворотки крови.
Пример расчета: больной Крайнов Т.В., 31 год.
 (мкат/л)
2.2.3. Определение общего холестерина в сыворотке крови ферментативным
методом «Фотокол»
(Творогова М.Г., 1995)
Определение основано на сопряженных реакциях, которые катализирует
холестеринэстераза, холесериноксидаза и пероксидаза:
Эфиры холестерина  холестерин + Ж.К.;
Холестерин + О2  холестинон + Н2О2;
Н2О2 + хромогены  Н2О + окрашенный продукт.
Концентрация образующегося в ходе реакции окрашенного продукта
пропорциональна концентрации холестерина в пробе.
Ход определения: Рабочий реагент обязательно вносить в пробирки после проб,
содержащих холестерин. Пробирки встряхнуть и инкубировать при t = 37o
С. Через 10 минут после начала инкубации пробирки повторно встряхнуть и
инкубировать 20 минут при t = 37oС. Окрашенные пробы фотометрировать
при 500 нм в кювете с длиной оптического пути 5 мм или 10 мм относительно
холостой пробы. Окраска стабильна в течении двух часов при комнатной
температуре.
Концентрацию холестерина в исследуемых пробах рассчитать по формуле:
 ммоль/л, где
ЕОП и ЕК – оптические плотности исследуемой пробы и пробы с калибратором.
Норма: 3,62 – 5,2 ммоль/л.
2.2.4. Определение циркулирующих иммунных комплексов
в крови методом ПЭГ-теста (Гриневич Ю.А., 1988)
Метод основан на селективной преципитации комплексов АТ-АГ в 3,75 % ПЭГ
(полиэтиленгликоля) с последующим определением плотности преципитата.
Реактивы:
1) 0,1 м боратный буфер (3,410 г борной кислоты, 4,275 г буры растворить
в 1 л дистиллированной воды)
2) 10 г полиэтиленгликоль – 6000 ед. растворить в 240 мл буфера.
Ход определения: К 0,3 мл сыворотки крови добавить 0,6 мл реактива №1,
перемешать и перенести по 0,3 мл в 2 пробирки. В I добавить 2,7 мл раствора №1
(контроль). Во II добавить 2,7 мл раствора №2 (опыт). Перемешать, инкубировать
в течение 60 минут при комнатной температуре. На спектрофотометре (КФК-3)
определяют оптическую плотность в кюветах 
при 450 нм.
Расчет: Высчитывают разность показателей оптической плотности, результат
умножают на 1000 и получают количество ИК в 100 мл сыворотки. Ответ выражают в
единицах оптической плотности. 
- количество ЦИК в 100 мл сыворотки.
Норма: 54,24 + 2,03 усл. ед.
Пример расчета: больной Максимов С.И., 19 лет.
Количество ЦИК в 100 мл сыворотки:
 усл. ед.
2.2.5. Определение уровня МСМ в крови (Габриэлен Н.И., 1984)
Метод основан на осаждении белков из исследуемой жидкости 10 % раствором ТХУ
с последующем центрифугированием и определением абсорбции света супернатантом
в 10 раз разведенным дистиллированной водой.
Ход работы: Сыворотку крови обрабатывают 10 % раствором ТХУ. В качестве контроля
лучше использовать сам раствор ТХУ в 30 раз разведенный дистиллированной водой.
Оптическая плотность его против воды составляет 0,123±0,012 усл. ед. на волне
254 нм при 23-25 С.
Центрифигируем 3000 об/мин в течение 30 минут. К 0,5 мл надосадочной жидкости
+4,5 мл дистиллированной воды. Измерение проводим на спектрофотометре в УФ
свете при 280 нм для определения ароматических аминокислот и при длине волны
254 нм для определения нуклеотидов. Уровень МСМ выражают в единицах,
количественно равных показателям экстинции.
2.2.6. Определение показателей «эффективная концентрация
альбумина» и «общая концентрация альбумина» в сыворотке крови человека
флуоресцентным методом
(Миллер Ю.И., 1994).
Принцип метода:
Метод основан на специфическом взаимодействии флуоресцентных органических
соединений с альбумином в сыворотке крови. В зависимости от условий этого
взаимодействия интенсивность флуоресценции красителя из альбумина отражает
различные свойства белка. Индекс ЭКА/ОКА не зависит от числа молекул
альбумина в пробе и характеризует физико-химические свойства молекулы
альбумина.
Состав набора:
Реактив I (4 ампулы по 5 мл). Предназначен для приготовления раствора
используемого при разбавлении сыворотки крови. Он содержит антикоагулянт
ЭДТА.
Реактив II (4 ампулы по 0,7 мл). Основным компонентом является специальное
флуоресцирующее соединение, интенсивность флуоресценции которого в сыворотке
крови пропорциональна концентрации сывороточного альбумина.
Реактив III (4 ампулы по 0,7 мл). Взаимодействие реактивов №2 и №3 с
сывороткой позволяет определить ОКА.
Определение показателя ЭКА:
К 2,0 мл надосадочной жидкости добавить 0,025 мл реактива 2. Перемешать.
Измерить интенсивность флуоресценции при длине волны возбуждения 420 нм и
длине волны испускания 515 нм.
Определение показателя ОКА:
В ту же пробу добавить 0,025 мл реактива 3. Перемешать. Измерить
интенсивность флуоресценции. Нормальные величины показателя ЭКА лежат в
интервале нормальных значений ОКА от 40 г/л – 55 г/л.
Подготовка образцов крови к измерениям:
Буферный раствор: Содержимое ампулы с реактивом 1 перенести в 100 мл
дистиллированной воды. Перемешать. 0,025 мл сыворотки крови добавить в
пробирку, содержащую 5 мл раствора для разбавления крови. Для анализа берут
жидкость 2,0 мл полученного образца.
Используют специализированный анализатор АКЛ-0,1.
3. Результаты исследования и их обсуждение
3.1. Определение показателей уровня интоксикации
в сыворотке крови практически здоровых людей
Нами было произведено исследование биохимических показателей – МДА,
активность каталазы, уровень холестерина, ЦИК, МСМ, Ит в сыворотке крови 51
донора в возрасте от 20 до 46 лет. Сыворотка крови доноров была получена на
ОСПК (областная станция переливания крови) г. Пензы.
Полученные результаты биохимических анализов были подвергнуты статистической
обработке, согласно методам и приемам статистического анализа.
По данным комитета экспертов Международной федерации клинической химии по
референтным величинам рекомендуется верхняя и нижняя границы нормы на уровне
М±1,96σ, состояние предболезни М±2σ, состояние острой формы
М±3σ.
Об уровне процессов ПОЛ судили по концентрации вторичного продукта МДА.
Содержание количества МДА составляет 3,61±0,07 мкМоль/л. Это значение близко
к данным, найденным в литературе (табл. 3.1.1). У 48 человек значение
содержания МДА входит в границы М±1,96σ. У 3 человек (5 %) содержание
МДА соответствует значению М±2σ, что соответствует состоянию
предболезни.
Активность каталазы у практически здоровых людей составила 16,7±0,15 мкат/л
(табл. 3.1.1). При исследовании активности каталазы в группе доноров
отклонений за пределы М±1,96σ мы не наблюдали.
Уровень холестерина, определяемый нами у практически здоровых людей составил
4,45±0,68 ммоль/л (табл. 3.3.1.), показатели уложились в границу референтной
величины М±1,96σ.
Содержание ЦИК, определяемое нами в сыворотке крови практически здоровых
людей составило 52,62±3,52 усл. ед. (табл. 3.1.1). 94 % людей по показателям
ЦИК входит в границы нормы, а 6% находятся в состоянии предболезни.
Уровень МСМ у обследованных доноров в среднем составил 0,280±0,01 усл. ед.
Это значение близко к данным, найденным в литературе (табл. 3.1.1). При
исследовании МСМ отклонений за пределы М±1,96σ мы не наблюдаем.
У практически здоровых людей определена детоксикационная нагрузка
сывороточного альбумина, т.е. определение общей и эффективной концентрации
альбумина. Токсичность по альбумину составляет 0,13±0,01 усл. ед. (табл.
3.1.1). Все значения токсичности по альбумину вошли в границы М±1,96σ.
Полученные нами данные не имели существенных отличий от значений этих
показателей, имеющихся в литературе в сравнении с приложением 2.
Таблица 3.1.1.
Содержание биохимических показателей в сыворотке крови практически здоровых
людей
Группа обследованных | n | МДАмкМоль/л | Активность каталазы мкат/л | ЦИКусл. ед. | МСМ усл. ед. | Ит усл. ед. | Холестерин ммоль/л | Практически здоровые | 51 | 3,61±0,07 | 16,7±0,15 | 52,62±3,52 | 0,28±0,01 | 0,13±0,01 | 4,45±0,68 |
3.2. Определение показателей уровня интоксикации
в сыворотке крови больных сальмонеллезом
Сыворотка крови больных исследовалась на базе центра госсанэпиднадзора г.
Пензы. Исследования биохимических показателей велись в острую фазу
заболевания и в период ранней реконвалесценции. Обследовано нами 30 больных
сальмонеллезом в возрасте от 17 до 46 лет, с целью установления показателей,
характеризующих эндотоксикоз: перекисное окисление липидов, уровень
холестерина, Ит по сывороточному альбумину, циркулирующих иммунных
комплексов, молекул средней массы и активности каталазы. Причем биохимические
показатели крови в разгар заболевания отличались от показателей в период
ранней реконвалесценции.
Таблица 3.2.1.
Биохимические показатели сыворотки крови
у больных сальмонеллезом
Группа обследованных | МДАмкМоль/л | Активность каталазы мКат/л | Итусл. ед. | ЦИК усл. ед. | МСМ усл. ед. | Холестерин ммоль/л | Контроль, n=51 (практически здоровые) | 3,61±0,07 | 16,7±0,15 | 0,13±0,01 | 52,62±3,52 | 0.280±0,01 | 4,45±0,68 | | Больные (острый период) n=30 | 7,19±0,2 | 13,09±0.16 | 0,29±0,01 | 100,63±4,04 | 0,550±0,02 | 6,54±0,07 | Больные (ранняя реконвалесценция) n=30 | 3,87±0,15 | 15,84±0,19 | 0,15±0,01 | 68,9±2,8 | 0,310±0,02 | 4,65±0,7 | | р≤0,001 | р≤0,01 | р≤0,001 | р≤0,001 | р≤0,05 | р≤0,01 |
Так, в ходе исследования выявлено достоверное увеличение количества МДА в
сыворотке крови больных сальмонеллезом на 99 % по отношению к контролю,
т.е. возрастает в 2 раза. Данные наших исследований подтверждаются сведениями
Л.Б. Оконенко, Л.Д. Мартыненко и другими. По данным этих авторов концентрация
МДА при сальмонеллезе возрастает в 2-2,5 раза.
Как видно из таблицы (табл. 3.2.1), у больных наблюдается интенсификация ПОЛ.
Под воздействием сальмонеллезного токсина происходит нарушение липидных
бислоев клеточных и субклеточных мембран. Накопление в крови первичных и
вторичных продуктов ПОЛ идет не в силу количественных изменений в содержании
фосфолипидов плазмы крови, а вследствие интенсификации их
свободнорадикального окисления. Результатом инициации ПОЛ становится
образование критических концентраций продуктов ПОЛ, которые токсичны для
организма. Известно, что повышение ПОЛ может приводить к нарушению
проницаемости мембран с последующей инактивацией мембранно-ассоциированных
ферментных систем, выходом лизосомальных гидролаз в цитозоль, что вызывает
повреждение ДНК т другие существенные изменения в структуре и функциональном
состоянии клетки [29, 43, 51, 52].
Установлено, что при ряде инфекционных заболеваний развивается
антиоксидантная недостаточность. Одновременно снижается актиность ферментов
антиоксидантной защиты, в частности каталазы [44].
По нашим наблюдениям, активность каталазы снизилась на 22 % в острый период
заболевания по отношению к контролю. В период ранней реконвалесценции
показатель активности каталазы приближается к контролю (табл. 3.2.1).
Л.Б. Оконенко, Л.И. Волкова в своих работах отмечает угнетение каталазной
активности. В острый период заболевания происходит резкое сокращение
антиоксидантной обеспеченности организма [26, 29].
А.С. Волков указывает на то, что в процессе эндотоксикации метаболические
расстройства приводят к гиперлипидемии. Это подтверждается данными наших
наблюдений. Так, уровень холестерина в сыворотке крови больных сальмонеллезом
в среднем составил 6,54±0,07 ммоль/л, что на 46,9% больше контроля (табл.
3.2.1).
Таким образом, гиперхолестеринемия характеризует патологию обмена липидов и
липопротеидов [32,45].
В период ранней реконвалесуценции уровень холестерина приближается к
контролю [рис. 3.2.1].
Процентное соотношение показателей липидного обмена при эндотоксикозе,
вызванном сальмонеллезной инфекцией
Рис. 3.2.1.
Анализируя результаты проведенных исследований, мы установили, что содержание
ЦИК в плазме крови больных сальмонеллезом на 91 % больше, чем в контроле
[рис. 3.2.2]. Полученные данные согласуются с выводами исследования И.А.
Ильинского, Т.В. Лукинской и других. Повышенное содержание ЦИК говорит о
снижении антителообразования в присутствии избытка антигенов. В подобной
ситуации ЦИК индуцирует острое иммунное воспаление, сопровождающееся
повреждением эндотелия сосудов и почечных клубочков, активацией кининовой
системы, что ведет к более серьезным метаболическим нарушениям [46, 47, 48].
Как правило, повышение уровня ЦИК обнаруживается уже в начальный период
болезни, на этом же уровне содержание их остается и в острую фазу. Только в
стадии реконвалесценции наблюдается понижение показателей [табл. 3.2.1].
Процентное соотношение показателей эндотоксикоза (ЦИК, МСМ) в сыворотке
больных относительно контроля
Рис. 3.2.2.
При воспалении воздействие протеиназ на протеогликановые комплексы тканей
приводит к образованию пула токсических веществ со среднемолекулярной массой
(МСМ).
У обследованных нами больных сальмонеллезом уровень МСМ на 96 % выше по
сравнению с контролем (рис. 3.2.2). По нашим данным содержание МСМ при
сальмонеллезе повысилось в 1,9 раза, что согласуется с данными исследований
Б.С. Нагаева и М.И. Габриловича. В наших исследованиях уровень МСМ повышается
в разгар заболевания [табл. 3.2.1].
Как указывают многие авторы повышение уровня МСМ является неблагоприятным
признаком. Объясняется это тем, что отдельные фракции МСМ обладают различной
биологической активностью: ингибируют эритропоэз, угнетают синтез
гемоглобина, ДНК, глюконеогенез, изменяют проницаемость мембран, нарушают
тканевое дыхание и микроциркуляцию. Поэтому, среди широкого круга
метаболитов, оказывающих токсическое действие, интегральным показателем
эндотоксикоза считают уровень МСМ [39, 40, 48, 56].
Важное звено в системе детоксикации организама представляет альбулин,
поскольку он переносит к гепатоцитам эндогенные метаболиты.
Эффективная концентрация альбулина при сальмонеллезе снижается, т.к.
токсические вещества занимают центры связания в молекуле альбулина.
Следовательно, связывающая способность альбулина может служить критерием
общей интоксикации организма. Загруженность альбулина метаболитами дает
информацию об эффективности функционирования печени и почек – основных
детоксирующих органов человека [41, 42].
В результате наших исследований ЭКА в острый период заболевания составила
42,3±2,87 (г/л), в период ранней реконвалесценции 43±2,16 (г/л). Содержание
ОКА в острую фазу заболевания составляет 54,5±3,52 (г/л), в период ранней
реконвалесценции 50±3,8 (г/л) [прилож. 6,7].
Снижение ЭКА ведет к повышению коэффициента токсичности. Было установлено,
что индекс токсичности у больных сальмонеллезом возрастает на 123 % по
сравнению с контролем [рис. 3.2.3]. По нашим данным уровень Ит в острую фазу
заболевания повысился в 2,3 раза [табл. 3.2.1].
На основании проведенных исследований можно сделать следующее заключение: у
больных сальмонеллезом происходят интенсификация ПОЛ и угнетение иммунитета,
снижение антиоксидантной защиты и детоксикационной способности организма.
Определение индекса токсичности по сывороточному
альбулину в сыворотке крови больных
сальмонеллезом
Рис. 3.2.3.
Таким образом, в наших исследованиях мы установили, что при сальмонеллезе
уровень показателей ПОЛ, уровень холестерина, Ит, ЦИК, МСМ повышается, что
согласуется с данными, имеющимися в литературе [рис. 3.2.4]. В исследуемой
нами группе больных наиболее информативными показателями являются МДА, Ит,
МСМ.
Выводы
Список литературы
1. Покровский В.И., Килессо А.В., Ющук Н.Д. Сальмонеллезы, результаты и
перспективы их научных исследований // Советская медицина. – 1994. - №5. – С.
3-8.
2. Будагян Ф.Е. Пищевые токсикозы, токсиноинфекции, их профилактика. – М.:
Медицина, 1989. – 207 с.
3. Покровский В.И. Острые кишечные инфекции // Советская медицина, 1989. -
№5. – С. 6-13.
4. Тимаков В.Д., Петровская В.Г. Биологические и генетические
характеристики рода salmonella. – М.: Медицина, 1990. – 293с.
5. Бунин К.В. Пищевые токсикоинфекции. – М.: Медицина, 1989. – 302 с.
6. Бойченко М.Н. Сальмонеллез: Распространение возбудителя в организме //
Журнал микробиологии и эпидемиологии, 1991. - №5. – С. 9-13.
7. Мельников В.И., Гимранов М.Г. Ферменты патогенности и токсины бактерий.
– М.: Медицина, 1995. – 252с.
8. Бунин К.В., Бродов Л.Е. О возможности возникновения инфекционно-
токсического шока при сальмонеллезе // Терапевтический архив, 1995. - №8. –
С. 27-32.
9. Пак С.Г., Гурьянов М.Х., Пальцев М.А. Сальмонеллез. – М.: Медицина,
1990. – 304с.
10. Кац Л.Н., Зигангирова Н.А. Жирнокислотный состав ЛПС бактерий
рода salmonella // Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1990. - №7. – С.
35-38.
11. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: Биологическая сущность и
происхождение // Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1996. - №3. – С. 43-
46.
12. Mannel D.N., More R.N. Endotoxinin – duced tumor cytotoxic factor
//Jn. Microbiology. – 1990. – Р. 141.
13. Ющук Н.Д., Тендетник Ю.М. Патогенез сальмонеллезов// Советская
медицина. - 1991. - №8. - С. 77-82.
14. Бунин К.В. Основы патогенетической иммунологии инфекционных
болезней// Клиническая медицина. - 1990. - №3. - С.9-13.
15. Малов В.А., Пак С.Г. Медико-биологические аспекты проблемы
интоксикации в инфекционной патологии // Терапевтический архив. - №1. - 1992.
- С. 7-12.
16. Аркамов В.А., Межирова И.М., Ткачук З. А. Патофизиологические
аспекты эндогенной интоксикации при кишечной инфекции // Анестезиология и
реаниматология. - 1990. - №5. - С. 28-32.
17. Кузнецов Н.Н., Девайкин Е.В., Егоров В.М. Синдром эндогенной
интоксикации при критических состояниях организма, новые диагностические и
прогностические возможности //Анестезиология и реаниматология. - 1996. - №6.
- С. 21-27.
18. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник
Российской академии медицинских наук. - 1998. - №7. - С. 43-57.
19. Шано В.П., Гюльмамедов Ф.И., Нестеренко А.Н. Варианты лечения
критических состояний с учетом патогенеза SIRS-синдрома системного
воспалительного ответа //Анестезиология и реаниматология. - 1997. - №6. - С.
48-52.
20. Юркив В.А. Эндогенные простагландины и их роль в механизме
развития диареи //Простагландины в эксперименте и клинике. – 1990. - №5. - С.
176-177.
21. Марков Х.М. Современное учение о простагландинах
//Патофизиология. - 1990. - №5 - С. 13-15.
22. Шубич М.Г., Авдеева М.Г. Медиаторные аспекты воспалительного
процесса //Архив патологии. - 1997. - №2 - С. 3-8.
23. Ерин А.И. Механизмы ПОЛ. Запуск и регуляция //Бюллетень
экспериментальной биологии и медицины. - 1994. - Т.118. -№10. - С. 343-348.
24. Мамонтова Н.С. Инициирование ПОЛ в сыворотке крови //Клиническая
медицина. - 1992. - №6. – С. 37-40.
25. Бурлакова Е.Б., Храпова И.Г. Перекисное окисление липидов мембран
и природные антиоксиданты // Успехи химии. – 1990. - №9. – С. 1540-1557.
26. Волкова Л.И., Бондаренко М.И. Перекисное окисление липидов и
механизм антиоксидантного действия // Врачебное дело. – 1991. - №12. – С. 35-
38.
27. Бенина Н.Ф., Чеганова М.И. Активность окислительно-
восстановительных ферментов у больных с хроническими воспалительными
заболеваниями // Клиническая медицина. – 1989. - №1. – С.17-22.
28. Ахмедов Д.Р. Клинико-патогенетическое значение антиоксидантной
системы при инфекционных заболеваниях // Иммунология. – 1994. - №2. – С. 25-
27.
29. Оконенко Л.Б. Перекисное окисление липидов при сальмонеллезе //
Журнал микробиологии и эпидемиологии. – 1994. - №6. – С. 55-58.
30. Махмудов О.С., Исматуллаев О.Ш. Клиническая эффективность
применения витамина Е в лечении сальмонеллеза // Клиническая диагностика. –
1990. - №6. – С.93-95.
31. Титов В.Н., Творогова М.Г., Никитин С.В. Холестерин сыворотки
крови: методические аспекты и диагностическое значение // Клиническая
диагностика. – 1992. - №3. – С.45-51.
32. Курашвили Л.В., Волков А.С. Прогностическая значимость
определения холестерина во фракции липопротеидов высокой плотности //
Клиническая диагностика. – 1993. - №3. – С.5-8.
33. Лященко Ю.И., Трихлеб В.И. Циркулирующие иммунные комплексы при
инфекционных заболеваниях // Советская медицина. – 1991. - №1. – С. 27-29.
34. Вельбри А.Л. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов и
иммуноглобулинов для характеристики патологического процесса // Лабораторное
дело. – 1990. - №5. – С. 7-18.
35. Виноградова Т.В., Капелько М.А. Взаимосвязь между уровнем ЦИК и
функциональным состоянием фагоцитирующей системы // Иммунология. – 1991. -
№5. - С. 63-66.
36. Сура В.В., Масонов Е.Л., Борисов Н.А. Клинико-патогенетические
закономерности развития болезней иммунных комплексов // Терапевтический
архив. – 1987. - №12. – С. 3-10.
37. Владыка А.С., Левицкий Э.Р., Поддубная Л.П. Средние молекулы и
проблема эндогенной интоксикации при критических состояниях различной
этиологии // Анестезиология и реаниматология. – 1990. - №1. – С. 37-41.
38. Николайчик В.В., Кирковский В.В., Лобачева Г.А. «Средние
молекулы» - образование и способы определения // Лабораторное дело. – 1989. -
№8. – С. 31-33.
39. Киреев С.С., Багмут Т.А., Курочкин М.Ю. Определение тяжести
эндотоскикоза при критических состояниях организма // Педиатрия. – 1990. -
№6. – С.107-109.
40. Владыка А.С., Беляков И.А. Диагностическое значение уровня МСМ в
крови при оценке тяжести эндотоксинемии // Вестник хирургии. – 1989. – №8. –
С. 126-129.
41. Иванов А.И., Сарнацкая В.В., Короленко Е.А. Модификация лигандной
нагрузки и структуры сывороточного альбулина человека при различных методах
выделения // Биохимия. – 1996. – т. 61. – вып.№5. – С. 903-912.
42. Миллер Ю.И., Добрецов Г.Е. Молекулярные основы флюоресцентного
метода определения связывающей емкости альбулина сыворотки крови // Биохимия.
– 1994. - №5. – С.20-28.
43. Мартыненко Л.Д., Шепелев А.П. Перекисное окисление липидов при
экспериментальной сальмонеллезной инфекции // Журнал Микробиологии и
эпидемиологии. – 1990. - №4.– С.7-10.
44. Чудинова В.В., Алексеев С.М. Перекисное окисление липидов и
механизм антиоксидантного действия // Биоорганическая химия. – 1994. - №10. –
т. 20. – С. 1029-1047.
45. Творогова М.Г. Степень достоверности однократного определения
холестерина (обзор литературы) // Клиническая диагностика. – 1997. - №1. – С.
4-5.
46. Ильинский И.А., Лукинская Т.В. Циркулирующие иммунные комплексы
при сальмонеллезе // Иммунология. -–1994. - №4. – С. 105-108.
47. Фролов В.М., Ющук И.Д. Иммунный статус больных сальмонеллезом //
Иммунология. – 1992. - №10. – С. 108-112.
48. Нагаев Б.С., Габрилович М.И., Кимова И.А. Содержание
среднемолекулярных пептидов в плазме крови больных сальмонеллезом //
Инфекционные болезни. – 1996. - №6. – С. 12-17.
49. Field M., Musch M.W. Role of prostaglandins in regulation of
instestional elektrolyte transport // Prostaglandins. – 1991. – vol.21. – P.
73-80.
50. Jaya P.S., Agstine J., Menon V.P. Roll of lipid peroxides,
glutathione and antiperoxidative erzymes in alcohd and drus toxicity // Exp.
Biol. Jndian J. – 1993. - №5. – P. 453-459.
51. Praper H.H., Sgvires E.J., Agarwal S., Hadley M. A comporative
evalution of thiobarbituric acid methods for the determination of
malondialdehyde in biological materials // Free. Radic. Biol. Med. – 1993. -
№4. – P. 353-363.
52. Anderson D., Phillips B.T. Schemere P. The effect of variovus
antioxidants and other modifying agents on oxygen radical generated DNA
famage in human lymphucytes in the comet assay // Environ. and Mol.
Mutagenes. – 1994. – 23. Suppl n.23. – P. 2-8.
53. Desharer David, Wood Gwendolyn E., Friedman Richard L. Mollecular
characterirution of catalase from Bortetella pertussis: Jdentification of the
Kat A promot er in an upstream insertion seguence // Mol. Microbiol. – 1994.
– №1. – P. 123-130.
54. Cheigton W.D., Zambent P.H., Mischer P.A. Circulationg immune
complexes in infections diseases // Jmmunol. – 1993. – v.111. – P. 1219-1227.
55. Webster David M., Rees Anthohy R. Antibody – antigen interactions
// Curr. Opinion struct. Biol. – 1994. - №1. – P. 123-129.
56. Schimuzu T., Kondo R. A method for the detection of Medium –
sized molecules //Anch. Biochem. – 1991. – vol. 206. – P. 271-276.
57. Bannet E.V. Chia D., Restivo C. et al. – peptides of the “middle
molecules” group // Analyt. Biochem. – 1994. – vol. 86. – P.271-278.
ПРИЛОЖЕНИЕ
Приложение 1.
Биохимические показатели крови
практически здоровых людей, n=51.
| № п/п | Ф. И. О. | Возраст | Пол | Дата анализа | МДА (мкМоль/л) | ЦИК(усл. ед.) | Уровень холестерина ммоль/л | Активность каталазы | МСМ (усл. ед.) | | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | | 1 | К. В. И. | 35 | Ж | 5.02.98. | 3,59 | 30 | 3,47 | 19,4 | 0,358 | | 2 | К. Б. А. | 39 | М | 5.02.98. | 3,62 | 30 | 4,95 | 17,2 | 0,225 | | 3 | У. С. Б. | 29 | М | 15.02.98. | 2,18 | 45 | 3,54 | 16,1 | 0,352 | | 4 | И. И. И. | 31 | Ж | 17.02.98. | 3,6 | 60 | 5,188 | 16,8 | 0,214 | | 5 | К. В. Л. | 34 | М | 17.02.98. | 3,48 | 100 | 4,90 | 17,1 | 0,287 | | 6 | М. В. В. | 40 | М | 17.02.98. | 4,6 | 69 | 3,915 | 15,8 | 0,254 | | 7 | С. П. Б. | 40 | М | 25.02.98. | 3,59 | 40 | 4,056 | 16,6 | 0,269 | | 8 | Л. Е. В. | 32 | М | 25.02.98. | 3,47 | 30 | 5,047 | 15,7 | 0,362 | | 9 | Г. Т. Ю. | 28 | Ж | 15.03.98. | 4,65 | 76 | 5,141 | 16,2 | 0,261 | | 10 | А. И. А. | 28 | Ж | 16.03.98. | 3,53 | 34 | 5,188 | 16,9 | 0,253 | | 11 | Л. Л. Я. | 40 | Ж | 16.03.98. | 4,00 | 99 | 3,77 | 17,4 | 0,357 | | 12 | С. Б. И. | 46 | Ж | 19.03.98. | 3,45 | 70 | 3,33 | 18,2 | 0,167 | | 13 | С. И. В. | 28 | Ж | 16.04.98. | 3,48 | 35 | 3,49 | 16,3 | 0,253 | | 14 | М. А. И. | 31 | М | 16.04.98. | 3,54 | 61 | 3,40 | 14,5 | 0,256 | | 15 | Х. А. И. | 37 | М | 22.04.98. | 4,47 | 30 | 4,24 | 16,1 | 0,268 | | 16 | К. И. П. | 30 | М | 22.04.98. | 3,59 | 34 | 3,91 | 16,4 | 0,377 | | 17 | Р. И. И. | 33 | М | 22.04.98. | 4,35 | 110 | 5,14 | 17,3 | 0,245 | | 18 | И. И. А. | 29 | Ж | 27.04.98. | 3,48 | 31 | 5,33 | 17,8 | 0,280 | | 19 | И. В. А. | 40 | М | 27.04.98. | 3,60 | 60 | 4,24 | 18,1 | 0,218 | | 20 | М. И. В. | 36 | Ж | 10.05.98. | 3,54 | 54 | 5,09 | 17,6 | 0,382 | | 21 | С. В. Г. | 32 | М | 10.05.98. | 4,0 | 33 | 4,86 | 16,7 | 0,355 | | 22 | З. О. А. | 32 | М | 12.05.98. | 3,77 | 45 | 3,77 | 16,3 | 0,232 | | 23 | Я. В. В. | 30 | М | 12.05.98 | 3,61 | 120 | 3,33 | 15,8 | 0,274 | | 24 | П. И. В. | 31 | М | 17.05.98. | 3,44 | 100 | 3,96 | 14,9 | 0,286 | | 25 | А. С. Б. | 36 | М | 17.05.98. | 2,93 | 69 | 5,14 | 16,8 | 0,253 | | 26 | С. А. И. | 20 | Ж | 3.02.99. | 3,61 | 70 | 5,19 | 16,6 | 0,268 | | 27 | М. И. В. | 34 | М | 9.02.99. | 3,53 | 43 | 5,05 | 17,3 | 0,351 | | 28 | Д. О. В. | 37 | Ж | 9.02.99. | 3,61 | 27 | 4,9 | 17,8 | 0,194 | | 29 | Т. С. Д. | 22 | М | 16.02.99. | 3,75 | 30 | 4,95 | 14,5 | 0,309 | | 30 | К. В. А. | 28 | М | 9.04.99. | 3,48 | 60 | 3,77 | 16,2 | 0,214 | | 31 | Ш. А. Л. | 30 | М | 17.02.99 | 3,59 | 58 | 4,48 | 17,2 | 0,232 | | 32 | Г. А. К. | 41 | Ж | 17.02.99 | 4,21 | 41 | 3,91 | 16,8 | 0,305 | | 33 | Ч. И. В. | 24 | М | 16.02.99 | 3,99 | 30 | 5,05 | 16,3 | 0,265 | | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | | 34 | С. О. Ю. | 30 | М | 16.02.99. | 3,57 | 35 | 3,58 | 16,9 | 0,239 | | 35 | С. С. М. | 27 | М | 16.02.99. | 3,02 | 46 | 3,39 | 15,7 | 0,248 | | 36 | М. С. В. | 29 | Ж | 9.02.99. | 2,50 | 38 | 5,14 | 14,3 | 0,372 | | 37 | Р. Т. А. | 28 | Ж | 9.02.99. | 3,88 | 33 | 3,77 | 16,2 | 0,245 | | 38 | С. С. В. | 28 | Ж | 16.04.98. | 2,61 | 54 | 4,24 | 16,8 | 0,261 | | 39 | С. В. В. | 32 | М | 16.04.98. | 3,14 | 37 | 5,38 | 17,1 | 0,379 | | 40 | Р. Т. В. | 23 | М | 15.05.98. | 3,99 | 19 | 4,95 | 18,3 | 0,358 | | 41 | О. А. Е. | 25 | М | 15.05.98. | 3,24 | 75 | 5,05 | 16,9 | 0,251 | | 42 | А. В. Е. | 33 | М | 18.05.98. | 3,88 | 28 | 4,56 | 17,5 | 0,275 | | 43 | Б. В. С. | 44 | М | 18.05.98. | 4,26 | 110 | 3,33 | 15,6 | 0,213 | | 44 | С. В. И. | 30 | Ж | 19.02.99. | 4,09 | 46 | 4,81 | 14,8 | 0,307 | | 45 | К. Ю. И. | 46 | М | 19.02.99. | 3,77 | 48 | 5,03 | 16,3 | 0,264 | | 46 | В. Ю. И. | 37 | М | 27.03.98. | 3,81 | 43 | 4,95 | 16,7 | 0,280 | | 47 | К. Е. И. | 32 | М | 27.03.98. | 3,54 | 44 | 5,33 | 16,9 | 0,232 | | 48 | Ж. Ю. С. | 30 | М | 5.04.98. | 4,04 | 85 | 3,77 | 17,3 | 0,218 | | 49 | П. В. А. | 31 | Ж | 5.04.98. | 3,15 | 23 | 4,24 | 18,8 | 0,381 | | 50 | Б. А. И. | 31 | М | 13.04.98 | 3,45 | 37 | 5,05 | 16,8 | 0,239 | | 51 | Л. Т. Ю. | 42 | М | 9.02.99. | 3,04 | 59 | 5,33 | | | | | | | Μ | 3,61 | 52,62 | 4,45 | 16,7 | 0,280 | | | | | m | 0,07 | 3,52 | 0,68 | 0,15 | 0,01 | | | | | σ | 0,48 | 25,17 | 0,09 | 1,04 | 0,06 |
Страницы: 1, 2
|
|
|
|
|
