Курсовая: Вирусы

Курсовая: Вирусы

области клеточной ДНК. Таким образом, в отличие от строго локализованной

интеграции генома фага Л с бактериальным геномоминтеграция генома SV 40 с

геномом клетки - хозяина скорее всего представляет собой процесс

неспецифический. в большинстве случаев в трансформированных клетках

обнаруживаются лишь фрагменты вирусной ДНК.

В клетках, трансформированных ДНК вирусами, содержится вирус специфическая

РНК. Используя сыворотки животных с опухолями, индуцированными

соответствующими вирусами, методом флуоресцирующих антител установили, что в

трансформированных клетках содержатся вирусные антигены. Так, в клетках,

трансформированных паповавирусами, всегда содержится Т-антиген-белок,

синтезируемый на ранней стадии литического цикла вируса. Следовательно, в

трансформированных вирусами клетках содержатся вирусные ДНК, РНК и белки ;

это наводит на мысль, что за трансформированное состояние ответственны

молекулы, кодируемые геномом вируса.

Роль трансформации при литической инфекции.

Согласно общепринятым взглядам, способность вируса вызывать заболевание - это

всего лишь побочный эффект работы механизмов, лежащих в основе размножения

вируса. Для самого вируса нет очевидной “необходимости” в том, чтобы вызывать

симптомы того или иного специфического заболевания у организма - хозяина.

Быть может, в основе развития у вирусов способности вызывать опухоли лежит

тот факт, что в делящихся клетках вирусы размножаются лучше, чем в

неделящихся. По-видимому, именно на этой основе развилась характерная для

онкогенных вирусов способность побуждать клетки к росту и делению. По крайней

мере в отношении паповавирусов и аденовирусов такое объяснение звучит весьма

убедительно : эти вирусы, проникая в клетки, вскоре индуцируют синтез ДНК,

ибо синтез ДНК является одной из стадий их литического цикла. Вероятно, гены

вируса, продукты которых ответственны за индукцию синтеза ДНК, - это те же

самые гены, которые ответственны за трансформацию клетки. Таким образом,

онкогенные свойства этих вирусов могут быть прямым следствием работы

механизма их репликации. Поскольку ДНК - содержащие вирусы трансформируют

клетки только при тех условиях, при которых сами размножаться не могут, их

способность превращать нормальные клетки в трансформированные, т.е. в клетки

способные к беспрерывному делению, может и не играть роли в их собственном

размножении. Более того, вариабельность точек интеграции вирусной и клеточной

ДНК наводит на мысль, что интеграция их геномов развилась в процессе эволюции

случайно, а не как необходимая стадия. И действительно, в естественных

условиях не описано случаев злокачественной опухоли, вызываемой паповирусами,

хотя доброкачественные опухоли, например бородавки у человека и папилломы у

кроликов, эти вирусы вызывают.

Индукция опухолей.

Реализация способности вируса вызывать образование опухолей зависит от многих

факторов. Одним из критических факторов могут быть свойства самого вируса :

например, избирательной способностью вызывать опухоли молочных желез обладает

лишь один класс ретровирусов. Определяющим фактором могут быть и свойства

клеток - мишеней, например наличие на их поверхности соответствующих

неблокированных рецепторов или присутствие внутриклеточных ограничивающих

факторов. Конечный результат может определяться и свойствами тканей, не

содержащих клеток - мишеней для данного вируса. В качестве примера можно

указать на способность организма - хозяина к иммунной реакции на данный вирус

или зараженные им клетки. Чтобы заражение организма вирусом привело к

возникновению опухоли, все факторы, имеющие отношение к этому процессу, в том

числе физиологические и генетические, способные блокировать индукцию опухоли

или ее развитие, должны быть представлены в пермиссивном варианте. Первым

условием реализации вирусного онкогена является наличие в организме хозяина

чувствительных к данному вирусу клеток. Когда речь идет о вирусах с узким

кругом чувствительных клеток - мишеней (к числу таких относится, например,

вирус лейкоза Френд, который специфически поражает только незрелые клетки

мышей), следует иметь в виду, что наличие в организме чувствительных клеток

может зависеть и от возраста или физиологического состояния.

Возможен и вариант, при котором в организме животного имеются клетки-мишени,

однако рецепторы вирусов блокированы. Ситуация такого рода возникает,

например, когда рецепторы, предназначенные для связывания с данным вирусом,

блокированы вирусными глико-протеидами родственного ему эндогенного

ретровируса, находящегося в клетке - мишени. Онкоген под влиянием

унаследованного вируса не является простым результатом индукции латентного

генома клетки - мишени. Более вероятно, что для этого соответствующий вирус

должен попасть в клетку - мишень, распространяясь по организму из какого-то

исходного пункта, где происходит индукция. Прямым свидетельством экзогенной

инфекции клеток при наследственном лейкозе является факт увеличенного числа

вирусных генов в опухолевых тканях. Иммунная система организма реагирует на

опухолевые клетки лишь в том случае, если они имеют новые поверхностные

антигены. Если животное предварительно иммунизировать клетками опухоли,

индуцированной паповирусом, то другая опухоль, индуцированная тем же вирусом,

у него при имплантации отторгается - свидетельство того, что данные вирусы

вызывают на поверхности трансформированных ими клеток образование

специфического опухолевого трансплантационного антигена. Этот антиген

является вирус - специфическим. Так, вирус полиомы и SV 40 индуцируют

различные трансплантационные антигены.

Вирусы и злокачественные опухоли у человека.

Одним из аргументов против роли вирусов в возникновении большинства

злокачественных опухолей у человека считается тот факт, что в подавляющем

большинстве случаев злокачественные опухоли не заразны, тогда как при

вирусной этиологии можно ожидать передачи от человека к человеку. Если,

однако, допустим, что в возникновении опухолей играет роль активация

наследуемых вирусов экзогенными факторами, то следует ожидать, что будут

выявлены факты наследственного предрасположения к злокачественным опухолям.

Такое предрасположение к развитию некоторых опухолей действительно

обнаружено, но этому можно найти различные объяснения. Несмотря на 10 лет

интенсивной работы, направляемой специальными правительственными программами,

связь между злокачественными опухолями у человека и вирусами все еще остается

проблематичной. Представляется в высшей степени странным, что онкогенные

вирусы, которые играют столь очевидную роль в возникновении опухолей у самых

разных животных, должны почему-то “обходить” человек

Взаимодействие между вирусами растений и их хозяевами.

Экспериментальные системы.

До недавнего времени большая часть исследований, касающихся размножения

вирусов растений и других аспектов взаимодействия этих вирусов с их

хозяевами, проводилась с применением различных комбинаций косвенных методов,

ибо отсутствовали культуры клеток растений, необходимые для количественного

изучения вирусной инфекции в системе in vitro. Однако за прошедшие десять лет

в этом отношении удалось добиться существенных успехов. Во-первых, был

разработан метод получения протопластов клеток растений, причем оказалось,

что эти культивируемые in vitro структуры можно заражать вирусами. Во-вторых,

было установлено, что из организмов насекомых - переносчиков вирусов,

вызывающих заболевания растений, - можно получать однослойные культуры

клеток, чувствительных к соответствующим вирусам. Оба этих подхода открывают

широкие возможности разработки точных методов титрования вирусов растений и

изучения их биосинтеза. Уже сейчас стало ясно, что у вирусов растений общая

стратегия их взаимодействия с хозяевами, реализующаяся на уровне одной

клетки, та же, что и у сходных с ними вирусов животных. Протопласты,

выделенные из мезофильных клеток табака, можно заразить ВТМ и таким образом,

изучить одиночный цикл размножения этого вируса. Установлено, что после

проникновения вирионов в клетку происходит быстрое освобождение их РНК от

белковой оболочки (декапсидирование), вследствие чего инфекционность

экстрактов клеток, находящихся на стадии эклипса, снижается.

Декапсидирование ВТМ осуществляется путем удаления из специального капсида

составляющих его субъединиц. Напротив, у ВЖМТ, имеющего икосаэдрическую

форму, РНК освобождается из вириона, по-видимому, без разрушения его белковой

оболочки. Освобожденная РНК превращается в репликативную и промежуточную

репликативную формы с помощью механизмов, вероятно сходных с теми, которые

существуют у РНК - содержащих фагов и пикорнавирусов. Вначале общее

содержание вирусной РНК возрастает экспоненциально, но на более поздней

стадии, когда происходит образование главным образом плюс - цепей РНК,

скорость синтеза становится линейкой. Созревание вируса начинается через 4-5

ч. после заражения. Молекулы вирусной РНК, синтезирующиеся на данной и

последующих стадиях инфекции, быстро заключаются в капсиды. Однако из клеток

выделяется лишь очень небольшое число варионов. Для большинства заболеваний,

вызываемых вирусами растений, характерно, что зараженные клетки продолжают

продуцировать вирус, не подвергаясь лизису и оставаясь жизнеспособными.

Благодаря этому в клетках растений, зараженных такими вирусами, как ВТМ,

концентрация вируса может достигать огромных значений. Инфекция передается от

клетки к клетке главным образом путем прямого переноса вирионов по

межклеточным мостикам (плазмодесмам).

Количественное изучение циклов репродукции вирусов растений можно проводить

на вирусах, размножающихся в однослойных культурах клеток насекомых. Так,

например, для ВЖКК, относящегося к группе рабдовирусов, была получена кривая

его размножения в культуре клеток цикадки, из которой видно, что стадия

эклипса продолжается 9 ч., а период размножения 20 ч. ; при этом выход вируса

превышает 10 000 вирионов на клетку. Провести такой точный анализ этой кривой

оказалось возможным, потому что, как было установлено при помощи метода

флуоресцирующих антител, данным вирусом удается синхронно заразить все 100 %

клеток культуры, а новосинтезированный вирус можно эффективно оттитровать,

используя для этого однослойные культуры клеток насекомых. При заражении

интактных растений первый цикл репродукции вируса трудно исследовать из-за

того, что вначале вирус заражает лишь очень небольшое число клеток растений,

а на более поздних стадиях инфекции, когда количество вируса или вирусных

продуктов становится достаточным для проведения точного анализа, циклы

репродукции вируса начинают перекрывать друг друга. Если ВЖКК накапливается в

культивируемых клетках насекомых в очень больших количествах, то он вызывает

слияние этих клеток с помощью механизма, который, вероятно, сходен с

механизмом слияния клеток под воздействием паралинсовирусов.

Репликация РНК вирусов растений, по-видимому, катализируется специфическими

РНК - репликазами. Из листьев, зараженных ВТМ, были выделены две формы РНК -

репликазы. Одна из них - нерастворимая форма, связанная с РНК ВТМ и способная

катализировать синтез специфической РНК с использованием

рибонуклеозидтрифосфатов. Вторая - растворимая форма с молекулярным весом

около 150 000, способная использовать в качестве матрицы для неспецифического

синтеза РНК любую из нескольких исследованных в этом отношении РНК. Связанная

форма репликазы, которую можно экстрагировать из клеток на поздних стадиях

вирусной инфекции, катализирует главным образом синтез плюс - цепей вирусной

РНК.

РНК ВТМ представляет собой одиночную цепь с молекулярным весом 2,3 10 ,

способную кодировать полипептид с молекулярным весом около 2,4 х 10 . В

системе in vivo эта РНК кодирует синтез нескольких белков, в том числе белка

оболочки (молекулярный вес 17 500) и двух больших полипептидов (молекулярный

вес 160 000 и 140 000). Совершенно очевидно, что генетической информации,

содержащейся в плюс - цепи РНК ВТМ, было бы недостаточно для кодирования всех

этих белков, если бы они синтезировались независимо друг от друга.

Следовательно, либо нуклеотидные последовательности, кодирующие синтез этих

белков, перекрывают друг друга, либо сначала синтезируется длинный

полипептид, который затем расщепляется на более мелкие полипептиды, либо

какой-то из этих полипептидов синтезируется на минус - цепи РНК.

Цитологические данные, полученные при изучении вирусных инфекций.

В течение долгого времени считали, что репликация ВТМ происходит только в

цитоплазме. Однако некоторые данные, полученные при цитологических и

цитохимических исследованиях, позволяют предполагать, что первичным местом

репликации РНК этого вируса является, вероятно ядро. Эксперименты с

использованием конъюгированных с ферритином акти - ВТМ - антител показывают,

что белок ВТМ появляется в клетках листьев через несколько дней после их

заражения и сначала обслуживается в цитоплазме главным образом вокруг ядерной

мембраны. Белок ВТМ выявляется также и в ядре клетки, однако, судя по

результатам электронной микроскопии, завершенные вирионы содержаться только в

цитоплазме, но не в ядре. Напротив, вирионы некоторых других вирусов

растений, например вируса штриховатости ячменя, обнаруживаются в

нуклеоплазме. На срезах клеток, зараженных вирусом желтой карликовости

картофеля, для которого характерно наличие внешней оболочки и который

морфологически весьма напоминает рабдовирусы, видно, что вирионы этого вируса

тесно ассоциированы с ядерной оболочкой. Возможно, что ядерная оболочка

служит источником некоторых компонентов входящих в состав внешней оболочки

этого вируса. В ядре вирионы этого вируса не обнаруживаются.

Одним из наиболее частых и характерных воздействий, оказываемых вирусами

растений на клетки, является образование внутриклеточных включений. В

большинстве случаев эти включения представляют собой агломераты вирусных

частиц, либо свободных, либо связанных с составными частями клетки.

Морфология и локализация включений варьируют в зависимости от вируса,

вызвавшего заболевание. Большинство вирусов растений образует только

цитоплазматические включения, но вирус гравировки табака, а также некоторые

другие вирусы образуют кристаллические включения в ядре клетки. Включения,

формирующиеся в клетках, зараженных другими вирусами растений, также могут

быть кристаллическими или амебоидными. в клетках опухолей, вызываемых вирусом

раневых опухолей, обнаруживаются цитоплазматические шарики, или вироплазмы,

состоящие из микрокристаллов этого вируса.

Распространение вирусов по растению.

Вирусы, введенные в растение путем механической инокуляции, медленно

распространяются по непроводящей ткани от первично зараженных клеток к

соседним. Скорость распространения ВТМ составляет примерно 1 мм в день, а

иногда и меньше. По-видимому, вирус, попавший в клетку, сначала в ней

размножается, а затем уже проникает в соседние клетки по межклеточным

канальцам, или плазмодесмам. Прежде чем ВТМ начинает двигаться из первично

зараженной клетки в соседнюю, проходит несколько часов. Из одной клетки в

другую могут мигрировать как интактные вирионы, так и вирусная РНК ; с

помощью электронной микроскопии вирионы были обнаружены в плазмадесмах. По

тканям растения могут распространяться также и вирионы, неспособные к

созреванию.

Когда вирус попадает в проводящую ткань либо из соседних паренхимных клеток,

либо непосредственно вводится туда насекомым - переносчиком, он быстро

движется сначала по жилкам, затем по черешку листа и, наконец, попадает в

стебель. В принципе вирус может распространиться по всему растению, причем

степень генерализации процесса зависит как от свойств вируса - хозяина.

Большинство вирусов, переносимых механически, относится к числу

гистологически “неограниченных” вирусов, а это означает, что они могут

проникать почти во все ткани зараженного растения. Как правило, первыми

атакуются вирусом активно растущие ткани и корни. Перенос вируса на

значительные расстояния происходит главным образом по флоэме вместе с током

пластических веществ, хотя вирусы могут мигрировать и по водопроводящей ткани

растения - ксилеля. Вирусы могут перемещаться вместе с водным раствором

органических веществ по членикам ситовидных трубок флоэмы, но это не

обязательно приводит к заражению вирусом этих клеток. Однако некроз флоэмы

при вирусных болезнях растений - отнюдь не редкое явление, доказательством

чего может служить некроз этой ткани, вызываемый вирусом скручивания листьев

картофеля. Перенос вирусов семенами наблюдается редко, а перенос пыльцой -

еще реже. Особенности процесса морфогенеза цветка, очевидно, таковы, что они

препятствуют проникновению вируса в гаметы. Вообще же клетки апикальных

меристем, зараженных вирусом растений, как правило, содержат мало вируса, а

иногда и вовсе свободны от вирусных частиц.

Степень распространения вируса по зараженному растению определяется ответной

реакцией зараженных клеток на инфекцию, а сама эта реакция может быть весьма

различной. К наиболее выраженным ее проявлениям относятся некротические

поражения. В этом случае клетки погибают так быстро, что часто даже не

успевают передать вирус соседним клеткам. Обнаружено, что при некротической

вирусной инфекции в клетках повышается уровень полифенолоксидазы.

К наиболее выраженным проявлениям реакции растений на заражение вирусом

относятся почти бессимптомные инфекции, обнаруживаемые лишь по очень слабым

симптомам или благодаря тому, что вирус, не причиняющий явного вреда одним

растениям, вызывает заболевания других. В этих случаях зараженные клетки

повреждаются незначительно и, как правило, сохраняют способность к делению.

Типичной реакцией клеток растений на заражение некоторыми вирусами является

интенсивное их деление и даже опухолевая трансформация. Механизм

опухолеродного действия вируса раневых опухолей пока остается неизвестным.

Неясно также, какую роль в этом процессе играет пфанение растении. Следует

учитывать возможность совместного действия гормонов растений с вирусами

(синергизм) в процессе индукции и стимуляции роста опухоли. Большая часть

изменений обменных процессов наблюдаемых при вирусных болезнях растений,

вероятно возникает в результате побочных воздействий, оказываемых вирусной

инфекцией на процессы фотосинтеза, дыхания, регуляции роста, а также

тракспорта воды, пластических и других веществ. Нарушения регуляции роста

приводят к морфогенетическим аномалиям самой различной значимости - от

мозаичности листьев и цветков до некротических поражений и аномальной

пролиферации побегов и образования опухолей. В местах некротических поражений

часто накапливаются некоторые вещества типа скополетина - флуоресцирующего

ароматического соединения, однако доказательства специфической роли вируса в

биосинтезе этих веществ пока отсутствуют.

Механизмы передачи вирусов растений.

Механическая передача вирусов растений на поверхность листа может быть

осуществлена в эксперименте со многими вирусами, однако маловероятно, чтобы

такой путь передачи был основным способом распространения вирусов растений в

естественных условиях. Одним из немногих исключений в этом отношении является

ВТМ. Передачу почти любого вируса можно осуществить прививкой. Хотя этот

способ заражения используется главным образом при экспериментальных

исследованиях, он может играть значительную роль в распространении вирусных

болезней плодовых деревьев и декоративных кустарников. Паразитное растение

повилика, гаустории которой внедряются в стебли растений - хозяев (таким

образом устанавливается живая связь между сосудистыми системами растения -

хозяина и паразита), служит полезным инструментом для изучения передачи

вирусов новым хозяевам. Однако очевидно, что такой механизм передачи вирусов

не может быть основным способом их распространения в природе.

Передача вирусов растений членистоногими переносчиками.

В естественных условиях наиболее важную роль в передаче вирусов от одного

растения к другому играют животные, питающиеся на этих растениях. Иногда

передача вируса растению переносчиком осуществляется чисто механическим

путем, но в большинстве случаев - это специфический процесс, отражающий

определенные связи, существующие между вирусом, переносчиком и растением.

Основными переносчиками вирусов растений служат членистоногие, особенно

насекомые, но иногда также и клещи. Есть много общего между взаимоотношениями

некоторых вирусов растений с их членистоногими - переносчиками и

взаимоотношениями арбавирусов животных (переносимых членистоногими) с их

переносчиками. Членистоногие - переносчики с колющим хоботком, высасывающие

сок растений, весьма эффективно переносят вирусы, поскольку они обладают

способностью вводить вирус в относительно глубоко расположенную ткань

растения - флоэму. Небольшое число вирусов попадает в ксилему, значительно

большее их число встречается во флоэме. Наиболее широк спектр вирусов

растений, переносимых тлями. Различают несколько типов передачи вирусов

растений насекомыми :

1) Внешняя передача, осуществляемая стилетом, без персистенции вируса в

организме переносчика. В этом случае вирус сорбируется на вершине стилета

насекомого, когда оно питается на зараженном растении, и может быть сразу же

перенесен на здоровое растение. Способность к передаче вируса может быть

утрачена очень скоро, а может и сохраняться в течение нескольких дней, но не

обнаруживается после очередной линьки. Возможно, что некоторые продукты

жизнедеятельности растений способствуют переносу вируса по этому механизму.

2) Регургитативная передача.

Вирус сохраняется в передней кишке насекомых (тлей и жуков) в течение

довольно длительного времени и передается здоровому растению путем

отрыгивания содержимого кишки.

3) Циркулятивная передача.

При данном типе переноса вирус может быть передан другому растению не сразу

после питания переносчика на больном растении, а лишь по окончании

определенного латентного периода. Продолжительность его может составлять от

нескольких часов до нескольких дней. При такой передаче способность

переносчика передавать вирус другому растению сохраняется намного дольше, чем

при регуртативной передаче. Было показано, что вирус циркулирует в тканях

насекомого и при линьке оно не утрачивает способности к переносу вируса.

4) Пропагативная передача.

Вирус действительно размножается в тканях насекомого, прежде чем достигает

его ротовых частей. Длительность латентного периода определяется временем,

необходимым для размножения вируса. В конечном счете вирус попадает в слюнные

железы насекомого и со слюной переносится в растение. Большой класс

переносчиков вирусов растений - цикадки почти всегда осуществляет передачу

вирусов растениям именно по этому механизму. К данному классу относится

переносчик вируса раневых опухолей и многие другие.

Способность насекомого переносить тот или иной вирус контролируется

генетически и может определяться различием в одном гене, который, по-

видимому, контролирует проницаемость кишечника для вируса. В пользу такой

точки зрения говорит тот факт, что после пункции брюшка насекомое,

неспособное передавать вирус, приобретает эту способность. Аналогичное

явление наблюдается и у насекомых - переносчиков некоторых вирусов животных.

Принимая во внимание тесные связи между насекомыми и растениями, которыми они

питаются, можно предположить, что вирусы в ходе эволюции распространились от

одного класса хозяев к другому и оказались избирательно адаптированными к

“двойному” образу жизни. Существенный этап инфекции такого рода представляет

проникновение в клетку вирусной нуклеиновой кислоты, генетические потенции

которой, объединенные с генетическими потенциями клетки, и определяют

возможность размножения вируса. Способ проникновения вирусной нуклеиновой

кислоты в клетку, вероятно, имеет менее важное значение, чем метаболические и

биосинтетические условия, существующие в клетке, в которую проник вирусный

геном.

Как уже упоминалось выше, некоторые вирусы растений, передаваемые насекомыми,

по ряду свойств напоминают вирусы животных.

Передача вирусов растений нематодами и грибами.

Заболевания растений, передающиеся через почву, известны давно. Однако роль

нематод в переносе некоторых вирусов растений, в том числе вируса кольцевой

пятнистости табака и вируса погремковости табака, была установлена

относительно недавно. Эти черви “приобретают” и передают вирус парзитируя на

корнях растений, и могут служить ему убежищем в течение ряда месяцев, однако

через яйца вирус, по-видимому, не передается потомству червей.

Известно, что вирус некроза табака и по крайней мере еще два вируса растений

переносятся примитивным паразитическим фикомицетом. Способность к передаче

специфична как в отношении штаммов вируса, так и в отношении штаммов

переносчика, и вирус переносится, по-видимому зооспорами гриба. Другие грибы,

вероятно, также могут служить переносчиками вирусов, связанных с почвой.

Вирусы, патогенные для насекомых.

Включения в их связь с вирусной инфекцией.

У насекомых известно много различных вирусных болезней. Некоторые из них

поражают полезных насекомых, таких, как тутовый шелкопряд, другие - насекомых

- вредителей, в борьбе с которыми они могут играть важную роль. При многих

вирусных заболеваниях насекомых в их клетках образуются полиэдрические

включения. Поэтому такие заболевания были названы полиэдрозами. Полиэдры -

специфические продукты инфицирующих клетку вирусов. При одних инфекциях они

образуются в ядре клеток, при других - в цитоплазме. При некоторых вирусных

заболеваниях, называемых гранулезами, в пораженных клетках образуются не

полиэдры, а гранулярные включения, или капсулы. Иногда патогенные для

насекомых вирусы вовсе не образуют внутриклеточных включений.

Ядерные полиэдрозы.

Ядерные полиэдрозы были описаны у чешуекрылых, перепончатокрылых и двукрылых.

Типичным примером может служить полиэдроз тутового шелкопряда. Через

несколько дней после инъекции гусенциале вируса или поедания ими

инфицированного корма в ядрах клеток большинства тканей появляются мелкие

включения. Постепенно их число и размеры увеличиваются и некоторые из них

могут достигать 10-15 мкм. В одном ядре может содержаться до 100 полиэдров.

Ядерный хроматин исчезает, клетки в концов гибнут, и свободные полиэдры

появляются в гемолимфе. Полиэдры тутового шелкопряда представляют собой

кристаллы, состоящие из белка с большим молекулярным весом (около 300 000),

который состоит из субъединиц с молекулярным весом около 20 000. Белок

полиэдров очень устойчив к действию протеолитических ферментов.

Белки полиэдрических включений, выделенных от различных насекомых, дают

перекрестные серологические реакции, но между белками организма - хозяина и

белками полиэдров серологического родства нет. Возможно, что белки полиэдров

кодируются структурными генами вируса. Некоторые вирусы удавалось в

эксперименте передавать другим насекомым - хозяевам, хотя частое наличие у

насекомых латентных вирусов осложняет интерпретацию таких результатов. Белки

полиэдров, образуемых данным вирусом у разных хозяев, серологически

идентичны. Внутри полиэдров лежат вирусные частицы, расположенные поодиночке

или группами. Подвергая полиэдры мягкому щелочному гидролизу, легко выделить

содержащиеся в них вирионы. Они состоят в основном из палочкообразных

капсидов, внутри которых находится двухцепочная ДНК, окруженная двумя

мембранами - внутренней (это, вероятно, один слой белка, соответствующий

капсиду) и внешней, окружающей скопления вирусных частиц и состоящей из белка

и липидов.

Для ДНК каждого вируса насекомых характерен свой нуклеотидный состав.

Количество ДНК в каждом вирионе составляет около 10 дальтон. Размеры

вирионов у разных вирусов насекомых варьируются в пределах от 30 до 50 нм в

поперечнике до 200-320 нм в длину. Наряду с такими крупными часто встречаются

и мелкие частицы - не развивающиеся, а скорее неполные или распавшиеся

вирионы.

Латентные инфекции.

Одна из удивительных особенностей вирусов насекомых - их способность

сохраняться в организме хозяина в латентном состоянии в течение многих

генераций. У насекомых почти наверняка имеет место трансовариальная передача

вируса, хотя не исключается и возможность заражения личинок во время их

выкормки. Находясь в латентном состоянии, вирус не вызывает каких-либо

видимых симптомов. Однако он может быть активирован каким-либо внутренним или

внешним фактором, что приводит к синтезу инфекционного вируса и появлению

симптомов болезни. Такое действие может оказать тепловой шок или смена пищи,

например замена листьев одной шелковицы листьями другой. Сходный эффект

получали с помощью рентгеновских лучей и некоторых веществ. Так, Ямафудзи

сообщил, что у тутового шелкопряда стимулами , провоцирующими симптомы

полиэдроза, могут служить формальдегид, гидроксиламин, перекиси, оксины и

нитриты. На основании этих данных Ямафудзи выдвинул теорию об образовании

полиэдрических вирусов из генетического материала хозяина в результате

мутагенного воздействия на хромосомную ДНК. Интересно, что к этой мысли он

пришел тогда, когда мутагенные свойства многих из упомянутых веществ еще не

были известны. Однако теория Ямафудзи не встретила большой поддержки, так как

известно, что намеренное заражение гусениц тутового шелкопряда вирусом

полиэдроза часто приводит не к заболеванию, а к латентной инфекции. Значит,

гусеницы, у которых после химического воздействия проявляются вирусы, уже

могли быть его скрытыми носителями. Поэтому “провирусная” теория латентности

вирусов полиэдроза кажется более правдоподобной, чем теория образования

вирусных геномов из генетических элементов клетки- хозяина.

Агент, вызывающий у дроздофилы чувствительность к СО .

Важная серия исследований была посвящена изучению трансмиссивного агента,

контролирующего чувствительность к СО некоторых рас дроздофилы. При

концентрации СО , вызывающей у устойчивых мух лишь обратимое состояние

наркоза, у чувствительных мух наступает паралич, и они погибают. Генетический

фактор, ответственный за эту особенность, получил обозначение О. Своей

трансмиссивностью, мутабильностью, размерами и специфичностью по отношению к

хозяину он напоминает вирус. В некоторых отношениях он сходен с умеренными

бактериофагами. В организме мух, чувствительных к СО , содержится вирус,

который можно извлечь из их тканей и инъецировать устойчивым мухам, в

результате чего последние тоже становятся чувствительными. Чувствительность к

СО возникает через несколько дней, причем это время зависит от величины

инокулума. Судя по инфекционным титрам экстрактов, полученных из

инокулированных вирусом мух, содержание вируса в организме сначала снижается,

а затем быстро возрастает до максимума, и именно в это время мухи становятся

чувствительными к СО . Вслед за заражением устойчивых к СО , но

восприимчивых к вирусу мух этот вирус после периода эклипса проходит стадии

вегетативного размножения и созревания, в результате чего содержание вирионов

- потомков в организме мухи достигает определенного максимума. Когда

количество вегетативного вируса достигает пороговой величины, муха становится

чувствительной к СО . Стабильное состояние, возможно, соответствует более

интимной интеграции вируса с организмом хозяина, при которой вирус переходит

в неинфекционное состояние и лишь изредка может порождать зрелые вирионы.

Стабилизированная форма вируса может передаваться самками всем потомкам

обоего пола. При внесении вируса в зиготу мужской гаметой он переходит в

нестабилизированную вегетативную форму.

Был установлен неожиданный и важный факт - морфологическое сходство вируса О

с рабдовирусами. Более того, оказалось, что один из рабдовирусов - вирус

везикулярного стоматита, - будучи введен дроздофиле, может вызывать

персистентную инфекцию и обуславливать стабильную чувствительность у СО .

Таким образом, установлен еще один случай родства между вирусами, найденными

у очень далеких друг от друга хозяев.

Происхождение и природа вирусов.

Вирусы как независимые генетические системы.

Какое место занимают вирусы в биологическом мире ? Каково их происхождение и

кто их ближайшие родственники ? Сведения о вирусах, изложенные в этой книге,

четко подтверждают положение, высказанное в самом ее начале : вирусы нельзя

уподоблять очень мелким клеткам. Вирусы - это элементы генетического

материала, у которых есть своя собственная эволюционная история, ибо в них

имеется все необходимое для их передачи от одного хозяина другому.

В этом смысле вирусы представляют собой независимые генетические системы. Это

не случайно отделившиеся фрагменты генома какой-то клетки. Вирусам присуща

генетическая непрерывность и способность мутировать, они содержат набор

генов, в результате согласованного действия которых образуются новые частицы

того же вируса. И наконец, вирусы имеют свою эволюционную историю, по крайней

мере отчасти независимую от эволюции организмов, в которых они

репродуцируются. В то же время вирусы не стоят в стороне от эволюционной

истории клеток и организмов. Их генетический материал в химическом отношении

сходен с генетическим материалом всех клеток, хотя у многих вирусов он

состоит из РНК - кодирующего полимера, оттесненного в процессе эволюции

клеток на второстепенную роль, в клетках РНК служит подсобным переносчиком

генетической информации, а не ее первичным носителем. Если сравнить ДНК с

Солнцем, то клеточные РНК будут планетами, которые светят отраженным светом ;

однако в РНК - содержащих вирусах эти планеты вновь стали самостоятельными

светилами.

Между тем независимость вирусов как генетических систем сама подвержена

эволюционным изменениям. Например, геном умеренного фага может как физически,

так и функционально интегрироваться с геномом бактерии. Он может существовать

в двух формах - в виде вируса и в виде группы хромосомных генов клетки -

хозяина. Когда в результате мутации умеренный фаг теряет способность

превращаться в профаг, он утрачивает одну из своих форм существования -

становится в большей степени клеточным компонентом, набором генов клетки. И

наоборот, когда профаг мутирует, превращаясь в дефектный профаг ( т.е. в

профаг, неспособный осуществлять все функции, необходимые для собственной

репродукции и заражения другой бактериальной клетки), он как бы, становится в

меньшей степени вирусом и в большей - клеточным компонентом, теперь его

дальнейшее существование зависит от сохранения данной клеточной линии или же

от “помощи” со стороны другого, недефектного вируса.

Хотя физическая интеграция генома вируса с хромосомой клетки - хозяина

детально изучена только в системе фаг - бактерия, известно, что многие

опухолеродные вирусы тоже включают свой геном в хромосому клетки. Во всех

группах вирусов известны также дефектные вирусы, нуждающиеся в помощнике. И

это не только варианты, изредка возникающие в лабораторных экспериментах :

такие вирусы существуют в природе и, несомненно, имеют значение для эволюции.

Превращение обычного вируса в дефектный, включившийся в геном клетки -

хозяина, формально можно рассматривать как превращение группы вирусных генов

в подгруппу генов клетки. И наоборот, группы клеточных генов могут

превращаться в геномы вирусов, и это относится не только к генам, внесенным в

клетку вирусами. Не исключено, что вирусные геномы могут возникать из

невирусных генетических элементов клетки. И мы должны поставить вопрос :

какие события играют важную роль в возникновении вирусов как организмов и в

эволюционной истории их генетического материала.

РНК - содержащие вирусы и клеточные РНК.

Само существование РНК-вирусов ставит ряд трудно разрешимых вопросов. Ни у

бактерий, ни у других организмов нет ничего достаточно похожего на репликацию

генетического материала в форме РНК. Правда, данные о том, что РНК -

содержащие фаги, относящиеся к одной и той же группе, обладают разными

специфичными для каждого фага механизмами репликации, заставляют

воздерживаться от окончательных выводов. Если эти данные верны, то не

исключено и существование пока еще не выявленных клеточных РНК -

реплицирующих систем. Такую возможность действительно постулировали, но

большей частью без достаточных оснований.

Если же клеточных аналогий не окажется, нам придется выбирать одну из ряда

других альтернатив. Например, мы может рассматривать РНК - содержащие вирусы

как уникальную группу, представляющую особое направление эволюции. Можно

также предположить, что эти вирусы произошли от ДНК - вирусов, информационная

РНК которых приобрела способность прямой репликации, так что транскрипция ее

с ДНК стала излишней. Но если считать это возможным, то нет причин

ограничиваться гипотезой возникновения РНК - вирусов на основе вирусной

информационной РНК : столь же серьезно мы должны рассмотреть и возможность

происхождения таких вирусов от клеточных информационных РНК.

Необходимым для этого этапа было бы приобретение соответствующего механизма

репликации и способности к образованию вирионов. Существование вирусов,

кодирующих обратную транскрптазу - фермент, транскрибирующий РНК вириона в

соответствующую ДНК, - показывает еще одну возможность : некоторые вирусы

могли бы приобрести РНК - репликазу, что позволило бы им обойтись без

обратной транскрипции, а заодно исключило бы возможность их интеграции с

хромосомой клетки. Перечисленные выше возможности, взятые в целом,

иллюстрируют ряд путей, которые могли бы при участии механизмов репликации

РНК вести к превращению сегментов хромосомного генетического материала

вирусные гекомы и наоборот. К сожалению, слишком большие пробелы в наших

знаниях пока не позволяют построить обоснованную модель такого рода.

Еще одну загадку составляет существование вирусов с генами из нескольких

фрагментов двухцепочечной РНК. Среди таких вирусов есть паразиты самых

различных организмов - бактерий, грибов, растений, насекомых и позвоночных.

Произошли ли все эти вирусы от общего предка ? Или разные группы их

возникали независимо на разных путях эволюции вследствие каких-то

преимуществ, связанных с подобным строением генома ? Ответов на эти вопросы

пока нет.

Происхождение вирусов и происхождение клетки.

Проблема происхождения вирусов - это, по существу проблема независимости

генетических элементов в репродуктивном и эволюционном отношении. Основные

вопросы здесь касаются того, насколько длинный путь прошли вирусы в своей

независимой эволюции и в какой точке разошлись пути эволюционного развития

вирусов и тех генетических элементов, которые мы находим в настоящее время в

клетках. Вирус, проникнув в клетку, может оставаться в ней либо в течение

какой-то доли клеточного цикла, либо на протяжении многих клеточных

генераций. У организмов, размножающихся половым путем некоторые вирусы могут

передаваться последующим поколениям через гаметы. Вирус, долго сохраняющийся

в клетке, практически не отличим от клеточного компонента. Такую частицу мы

могли бы счесть вирусом, плазмидой или геном в зависимости от типа

воздействия, благодаря которому ее удалось обнаружить. Таким образом,

проблема происхождения вирусов включает : 1) вопрос об отношении между

вирусами и клеточными компонентами, 2) вопрос о происхождении клеточных

компонентов и 3) вопрос о родстве между различными генами вирусов. Довольно

широко распространено представление о “монофилетическом” происхождении клетки

- о том, что набор ее генов, то есть геном создавался в результате

дифференциации одного исходного самовоспроизводящегося элемента, копии

которого иногда не разделялись и благодаря мутациям приобрели различные формы

и функции. Из таких групп генов должны были затем образоваться хромосомы, ибо

наличие какого-то организованного механизма, обеспечивающего равное

распределение генетического материала, дает большое преимущество - помогает

сохранять благоприятные комбинации генов.

Появление полового процесса в ходе дальнейшей эволюции усложнило эту схему,

однако у организмов, у которых еще не было полового процесса, все гены должны

были возникнуть в пределах одной клеточной линии. Согласно самой простой

гипотезе, цитоплазма целиком является продуктом деятельности генов. Таким

образом, все генетические компоненты клеток, относящихся к одной линии,

должны иметь единое происхождение. Передача генетического компонента - гена

или хромосомы - другой клетке была бы уже слиянием части генетического

материала одной линии с геномом другой линии. С другой стороны, не исключена

возможность и полифилетического происхождения нормальной клетки. Несколько

первичных самореплицирующихся молекул могли, объединившись, создать

благоприятную комбинацию и сформировать в дальнейшем клеточный геном. Или же,

наконец, какие-то генетические элементы могли проникнуть в уже образовавшуюся

клетку. Слияние генетического материала разных линий могло бы произойти на

относительно раннем этапе эволюции клетки, и тогда приобретение геном,

хромосомой или плазмидой способности переходить из одной клетки в другую было

бы возвращением к исходной независимости и повторением исходного процесса

слияния.

Таким образом, все теории происхождения вирусов сводятся к рассмотрению

различных возможностей слияния двух или большего числа генетических элементов

и образования из них функционирующей генетической системы. В случае вирусов,

вызывающих быстрое разрушение клетки, такое слияние может не быть очевидным,

и фундаментальное значение этого процесса не было замечено ранними

вирусологами, для которых вирус, размножающийся в клетке, был подобен

бактерии, растущей в культуре. На самом же деле даже клетка, зараженная

вирулентным вирусом и обреченная на быструю гибель, представляет собой

функциональную систему, чья конечная судьба - полная дезинтеграция - это лишь

побочный результат главного события, а именно генетической и биохимической

интеграции вирусных и клеточных механизмов. Слияние может приводить к

длительной интеграции клетки с вирусом, которая сохраняется в течение

нескольких клеточных генераций, иногда даже при половом процессе. В случае

профагов, а возможно, и некоторых опухолеродных вирусов интеграция может

стать почти постоянной. Некоторые плазмиды и, быть может, даже сегменты

хромосом могли сформироваться именно таким путем. С другой стороны, эволюция

механизмов, реализующих передачу генетического материала, могла привести к

превращению отдельных генов и групп генов в плазмиды и вирусы.

Из всех живых существ, быть может именно для вирусов монофилетическое

происхождение наименее вероятно, ибо вирусы всегда реплицируются в окружении

больших количеств невирусных нуклеиновых кислот, способных включаться в их

геном. К какой категории мы отнесем данный генетический элемент - к генам,

плазмидам, или вирусам, - в конечном счете будет зависеть от того, насколько

длительным был период общности его эволюционной истории с историей других

компонентов генома. Способность к возвращению независимости может

определяться не только мутабельностью, но длительностью совместного

существования, которая может приводить ко все большей взаимозависимости между

различными компонентами клетки. Экзогенный элемент внесенный в клеточную

линию, вероятно, подвергнется столь же выраженным эволюционным изменениям,

как и любой другой генетический компонент клетки, и будет не более похож на

своего первичного предка, чем похожи на своих предков эти компоненты.

Передаваемые генетические элементы, быстро разрушающие новую для них

клеточную систему, должны были бы в большинстве случаев исчезать, так как они

могли бы сохраниться только при доступности для них бесчисленного множества

клеток - хозяев. Часто, однако, слияние могло быть долговременным. При этом

остается важный вопрос, на который пока нельзя ответить : является ли такое

слияние новой и необычной особенностью, ведущей в основном к образованию

аномальных комплексов, не имеющих значительной эволюционной ценности, то есть

больных клеток, или же это один из процессов, который играл и все еще играет

существенную роль в эволюции ( а возможно и в онтогенезе) ?

Вирус может быть и регрессировавшим паразитом, и фрагментом клеточного

генома, ставшим инфекционным, в зависимости от того, какую фазу его

эволюционной истории мы наблюдаем. В различное время он может быть и тем и

другим. Подобно тому как изучение структуры и размножения вирусов в конце

концов всегда приводит нас к клетке как системе, в которой имеют место

проявления жизни, так и проблема происхождения вирусов возвращает нас к

вопросу о происхождении клеток как интегрированного целого.

Вирус - это, по существу, часть клетки. Мы считаем вирусами те компоненты

клетки, которые достаточно независимы для того, чтобы передаваться другим

клеткам, и сравниваем их с другими клеточными компонентами, более прочно

связанными со всей системой. И именно эти свойства вирусов делают их

бесценными для биологов, предоставляя им уникальную возможность наблюдать в

относительно изолированном виде активные детерминанты биологической

специфичности - по истине те кирпичики, из которых построено все живое.

Страницы: 1, 2, 3, 4