 |
РУБРИКИ |
: Литература - Другое (книга по генетике) |
РЕКОМЕНДУЕМ |
||
|
: Литература - Другое (книга по генетике)тельно, и окружающие его концевые участки исходных крупных фрагментов. Отобранные последовательности клонируют в фаго- вых или космидных векторах, получая библиотеку генов конце- вых участков. Затем в этой библиотеке проводят скрининг кло- нов, содержащих стартовый зонд. Только в этих клонах компле- ментарные зонду последовательности соединены маркерным геном с последовательностями ДНК, отстоящими от стартового участка поиска на длину прыжка. При необходимости промежуточные сег- менты ДНК также могут быть клонированы с использованием ме- тода скользящего зондирования. Остановимся теперь на тех критериях, по которым можно отличить сегменты ДНК, являющиеся частями генов, от любых других последовательностей (Рис.3.7.) (Lindsay, Bird, 1987; Rommens et al., 1989; Wicking, Williamson, 1991; Collins, 1992). Условно эти критерии могут быть разделены на три группы. В первой группе исследуют структурные особенности генных последовательностей. Вторая группа критериев основана на поиске функциональных участков генов. В третьем случае анализируют характер нуклеотидных последовательностей тести- руемых фрагментов ДНК. Диагностику структурных участков ге- нов осуществляют путем гибридизации с ДНК-зондами или прямым скринированием кДНК-овых библиотек. Функциональная диаг- ностика генов включает улавливание экзонов (exon trapping), промоторных участков, поли-A сигнальных последовательностей, а также перенос генов в иные конструкции и идентификацию в них соответствующих транскриптов. И, наконец, поиск генов может быть осуществлен путем прямого секвенирования крупных фрагментов ДНК с последующим компьютерным анализом нуклео- тидной последовательности и сопоставлением её с присутствую- щими в базах данных идентифицированными генами других видов живых существ. Как уже отмечено ранее, кодирующие области генов, представленные в геноме уникальными последовательностями, достаточно консервативны в процессе эволюции. Существует высокий процент гомологии в структуре ДНК между одинаковыми генами у разных видов млекопитающих. На этом факте основан, так называемый зоо-блот - скрининг клонированных последова- тельностей, не содержащих повторов, но дающих перекрестную гибридизацию с геномной ДНК, выделенной из разных видов жи- вотных - приматов, сельскохозяйственных животных, грызунов, птиц, рептилий. Клоны, содержащие консервативные последова- тельности, подвергают дальнейшему анализу на присутствие в инсертированных фрагментах ДНК CpG островков, часто маркиру- ющих 5'-фланкирующие области генов позвоночных, особенно ге- нов домашнего хозяйства ( см.Главу II,2.4), и исследуют на- личие открытых рамок считывания -ORF (open reading frames). Дальнейший поиск генов в более узком интервале может быть осуществлен с помощью компьютерного анализа соответствующей нуклеотидной последовательности ДНК. Кроме того, все клони- рованные ДНК из этого интервала могут быть сразу использова- ны для анализа РНК-транскриптов (Iannuzzi, Collins, 1990). Важным доказательством принадлежности клонированной ДНК гену является идентификация гомологичных РНК транскриптов в тканях, где можно предполагать экспрессию этого гена. С этой целью проводят гибридизацию уже отобранных по первым двум критериям клонов ДНК с тотальной мРНК, выделенной из этих тканей, а также скринируют соответствующие кДНК-овые библио- теки. Для генов наследственных заболеваний с неизвестным первичным биохимическим дефектом библиотеки конструируют из пораженных органов и тканей. При обнаружении последователь- ностей кДНК, гибридизующихся с геномными зондами, их, в свою очередь, используют для зондирования библиотеки и выявления всех клонов с перекрывающимися последовательностями кДНК. К сожалению, для генов с низким уровнем экспрессии гибридиза- ция может не дать положительных результатов. Выделенные клоны, удовлетворяющие перечисленным крите- риям, с большой вероятностью содержат последовательности ДНК, являющиеся частями гена. Однако, всегда существует опасность выбора какого-то другого гена (или псевдогена), локализован- ного в той же области ДНК. Поэтому требуются дополнительные доказательства идентичности выбранной последовательности ДНК специфическому гену. Такие доказательства могут быть получе- ны, например, при определении нуклеотидной последователь- ности кДНК и сопоставлении ее с аминокислотной последова- тельностью кодируемого этим геном белка. Веским доказа- тельством в пользу правильности проведенной идентификации гена может быть обнаружение мутантных вариантов аллелей в изолированных последовательностях ДНК у больных, страдающих соответствующим наследственным заболеванием. Так, например, при идентификации гена муковисцидоза, у 70% больных в клони- руемой кДНК последовательности была обнаружена однотипная мутация - делеция трех нуклеотидов - delF508. Наконец, реша- ющим аргументом правильности идентификации нужного гена яв- ляется успешно осуществленная с его помощью генокоррекция первичного биохимического дефекта, выполненная на соот- ветствующих культурах мутантных клеток, или получение стой- кого терапевтического эффекта у трансгенных животных - био- логических моделей данного наследственного заболевания. Определение размера молекул мРНК, гибридизующихся с ге- номными клонами, дает оценку суммарной величины гена. Эта оценка имеет важное значение для реконструирования полнораз- мерной кДНК. Её клонирование, по-сути, означает идентификаию гена, так как позволяет определить его границы в геномной ДНК, охарактеризовать его экзонно-интронную структуру и ре- гуляторные элементы. Зная первичную нуклеотидную последова- тельность кДНК, можно с уверенностью прогнозировать амино- кислотную последовательность соответствующего белка и таким образом определить первичное биохимическое звено в патогене- зе соответствующего наследственного заболевания. Описанный способ изучения молекулярных и биохимических основ наследственных заболеваний получил название обратной генетики, а сам процесс в отличие от традиционного пути от белка к гену, так называемого функционального клонирования, был назван позиционным клонированием, тем более, что термин обратной генетики уже использовался ранее для обозначения метода анализа функции гена путем направленного введения в него мутаций (Collins, 1992). Возможность использования функционального клонирования зависит от доступности информации о белковом продукте и/или о функции соответствующего гена. Для подавляющего боль- шинства моногенных болезней определение первичного биохими- ческого дефекта представляет собой очень трудную задачу из-за недостаточного понимания функционирования огромного числа клеточных ферментов, сложностей их взаимодействия, низких концентраций, отсутствия эффективных методов выделе- ния и очистки а, зачастую, даже из-за отсутствия сведений о клетках - мишенях, в которых следует искать первичный биохи- мический дефект. Поэтому на фоне стремительного роста данных о структуре генома чеовека и, прежде всего, о насыщенности генами и анонимными ДНК маркерами отдельных хромосом и их сегментов, реальные соотошения функционального и позиционно- го клонирования в идентификации генов, ответственных за наследственные заболевания, быстро меняются в сторону бе- зусловного доминирования последнего. Успех позиционного клонирования определяется возмож- ностями картирования гена, при этом функция гена исследуется уже после его идентификации и клонирования. На рис. 3.8 представлена общая схема позиционного клонирования, за- имствованная из работы Коллинза (Collins, 1992). Обычно, для нахождения положения неизвестного гена на карте сцепления используют 100 - 200 полиморфных маркеров. После обнаружения хромосомной принадлежности картируемого гена более точная локализациия может быть установлена с помощью при- цельного отбора дополнительных индексных маркеров из опреде- ленного цитогенетического сегмента. Картирование гена, оп- ределяющего наследственное заболевание, может быть значитель- но ускорено при наличии у какого-то больного цитогенетически видимой структурной перестройки в области локализации этого гена, чаще всего делеции или транслокации. Хотя такие паци- енты, как правило, встречаются редко, но описание даже одно- го такого случая может исключить необходимость картирования гена путем последовательного анализа его сцепления с генети- ческими маркерами целого генома и позволит перейти не- посредственно к молекулярному клонированию. Именно таким об- разом были идентифицированы гены хронического грануломатоза, миопатии Дюшенна, ретинобластомы, X-сцепленной глухоты, ней- рофиброматоза I, аниридии и некоторых других наследственных болезней. С другой стороны, в ряде случаев удается исключить дли- тельный процесс молекулярного клонирования, используя метод "кандидатного гена". Разработка методов, облегчающих нахож- дение транскрибируемых областей генома, улавливание экзонов и регуляторных участков генов, секвенирование и картирование методами гибридизации in situ большого количества анонимных кДНК последовательностей, изолированных из тканеспецифи- ческих библиотек, все это в комплексе приводит к значитель- ному увеличению степени насыщенности различных сегментов хромосом известными генными последовательностями, среди ко- торых и осуществляют поиск гена-кандидата. Большая роль в этих исследованиях принадлежит также мутантным генетическим линиям животных, моделирующим различные наследственные забо- левания человека (см Глава VIII). Значительное сходство нук- леотидных последовательностей кодирующих участков гомологич- ных генов млекопитающих и человека, наличие большого числа консервативных групп сцепления с наборами идентичных генов позволяют успешно вести параллельные исследования геномов человека и других животных, значительно ускоряющие эффектив- ность поиска и молекулярного анализа индивидуальных генов человека (Dietrich et al., 1994; Copeland et al, 1993). Молекулярная идентификация генов открывает широкие возможности для анализа тканеспецифической регуляции их экспрессии в процессе развития организма на всех уровнях от транскрипции до трансляции. Следуюшим этапом молекулярного анализа является генотипирование мутаций и исследование тех нарушений в структуре, локализации или в ферментативной ак- тивности соответствующих белков, которые возникают в резуль- тате изменений нуклеотидных последовательностей ДНК. Эти проблемы более подробно освещены в следующих разделах книги. Отметим только, что в настоящее время подобные исследования стали возожны для многих сотен наследственных заболеваний человека, для которых идентифицированы геномные последова- тельности ДНК, соответствующие генам, и проклонированы пол- норазмерные кДНК-последовательности. Раздел 3.6 Каталог генов и генных болезней МакКьюсика. Международная программа "Геном человека". Огромный вклад в систематизацию и обобщение информации о генетических картах хромосом человека, локализации и функ- циях отдельных генов, и о структуре генома в целом, вносят исследования, проводимые на протяжении последних 30 лет в Университете Джона Хопкинса в Балтиморе под руководством профессора Виктора МакКьюсика. Результатом этих исследований является систематическое, с 2-х-годичным интервалом между последними пятью публикациями, издание энциклопедий, содер- жащих сводные данные о всех картированных генах человека и связанных с ними наследственных болезнях под названием: "Менделевсое наследование у человека: каталог человеческих генов и генетических болезней" ("Mendelian inheritance in man. Catalogs of autosomal dominant, autosomal recessive, and X-linked phenotypes". Эти издания содержат современные хромоcомные карты генов человека и для каждого локуса обоб- щенные в виде отдельных статей сведения о характере наследо- вания, функциях и размерах генов; методах их картирования и идентификации; кодируемых продуктах; мутантных аллелях, по- лиморфизмах и внутригенных повторах; фенотипических проявле- ниях мутаций, их связи с наследственными заболеваниями, а также о природе основного дефекта, включая патогенез и пато- физиологию заболевания. Все статьи снабжены исчерпывающими литературными ссылками. Cводные таблицы по картированным ло- кусам с различным типом наследования и по генам наследствен- ных заболеваний составлены либо в соответствии с их хро- мосомной локализацией, либо в алфавитном порядке по названи- ям генов или по наименованиям соответствующих генных болез- ней. Отдельно представлены данные по клонированным генам, для которых известен первичный молекулярный дефект. При этом количество различных идентифицированных мутантных вариантов для разных генов колеблется от одного до нескольких сотен. Издания содержат также список доступных мутантных клеточных линий. Каждому локализованному менделирующему локусу в этой энциклопедии присвоен шестизначный номер (MIM), первая цифра которого определяет характер наследования: 1 - для аутосом- но-доминантных генов, 2 - для аутосомно-рецессивных, 3 и 4- для генов, локализованных в X- и в Y-хромосомах, соот- ветственно, 5 - для митохондриальных генов. Четыре цифры, следующие после точки непосредственно за шестизначным номе- ром, предназначены для кодирования различных мутантных вари- антов данного локуса. Издания выпускаются как в печатной форме, так и в компьютерном варианте (OMIM) на дискетах или на компакт-дисках. В последнем случае они снабжены програм- мами, позволяющими осуществлять поиск по любой позиции и проводить постоянное обновление энциклопедии текущей инфор- мацией. Программы OMIM совместимы с другими базами генети- ческих данных, в первую очередь, с GDB (Genome Data Base), содержащей полную информацию (включая последовательности ДНК) обо всех картированных генах, ДНК-маркерах и ДНК-зондах человека, а также и с GenBank - полной базой данных всех из- вестных нуклеотидных gоследовательностей ДНК. В последнем 11-ом издании энциклопедии МакКьюсика со- держатся сведения о 6678 картированных менделирующих локусах человека (McKusick, 1994). Из них 4458 генов с аутосомно-до- минантным характером наследования, 1730 - с аутосомно-ре- цессивным, 412 генов локализовано в X-хромосоме, 19 - в Y-хромосоме и 59 - в митохондриальной ДНК. Для более чем 2800 картированных генов определена их функция. С моногенны- ми заболеваниями связано 770 картированных локусов, а общее число нозологических форм, для которых гены картированы, включает 933 заболевания. При этом более 420 генов наследственных болезней уже клонированы и для каждого из этих генов описано от одного до нескольких сотен мутантных вариантов аллелей, характеризующихся различным фенотипи- ческим проявлением. Различные хромосомы и их участки картированы с разной степенью детализации. На самой крупной по размерам хромосоме 1 картировано вдвое меньше генов, чем на Х-хромосоме ( 200 и 400 соответственно). Плотность уже картированных генов в разных хромосомах очень неравномерна. Так, хромосома 19 со- держит 178 генов, тогда как хромосома 13 только 40, при этом первая больше второй. Хромосомы 17 и 18 примерно равны по величине, но на первой уже картировано 180 генов, а на вто- рой- только 26. На хромосоме 2 картировано примерно такое же количество генов (около 175), как и на втрое меньше её по размерам хромосоме 17. Существеные различия в числе картиро- ванных генов отмечаются и внутри различных участков хро- мосом. К примеру, 19 из 43 генов хромосомы 21 локализованы в сегменте 21q22.3, составляющем лишь 20% длинного плеча. Об- ласть 9q34 занимает 10% хромосомы 9, но содержит 27% генов - 38 из 141 (Antonarakis, 1994). Число подобных примеров не- равномерного распределения картированных генов по хромосо- мамс может быть значительно увеличено. Более 10 лет тому назад был полностью просеквенирован митохондриальный геном (Anderson et al., 1981), состоящий из 16 569 нуклеотидов и содержащий 37 генов, 22 из которых это гены транспортных РНК, 2 гена рибосомальной РНК и 13 белко- вых генов, кодирующих субьединицы комплексов окислительного фосфорилирования (OXPHOS). Следует отметить, что 56 субьеди- ниц этого комплекса кодируется ядерными генами (McKusick: 1994). Митохондриальная ДНК очень плотно насыщена кодирующи- ми участками, так как митохондриальные гены не содержат инт- ронов и имеют очень ограниченные размеры некодирующих флан- кирующих ДНК. В настоящее время описано достаточно много бо- лезней, связанных с мутациями в митохондриальном геноме, и все они развиваются вследствие нарушений в системе окисли- тельного фосфорилирования. Мы уже упоминали о том, что в настоящее время проклони- ровано около 20 000 анонимных последовательностей кДНК, вы- деленных из тканеспецифических библиотек генов и представля- ющих около 10-15% всех генов человека. Хотя этих последова- тельностей пока нет на картах генов, секвенирование, со- поставление с компьютерными базами данных и гибридизация in situ позволят уже в самое ближайшее время провести их иден- тификацию и локализацию (McKusick, Amberger, 1993). Следует отметить, что каждый картированный ген и поли- морфный локус сами по себе автоматически становятся точками отсчета в геноме, то есть молекулярными маркерами. Наряду с этим, продолжается интенсивное насыщение генома новыми моле- кулярными маркерами типа STS ( sequence tagged sites) и мик- росателлитными повторами типа STR (short tandem repeats) (cм. Главу II). К сентябрю 1994г Genome Database (GDB) вклю- чала 6691 STR-сайтов и 3 752 из них (56%) имели уровень ге- терозиготности более 60%. Карты сцепления для индексных мар- керов сконструированы, в основном, по результатам генотипи- рования сорока CEPH референтных семей (см.Глава II,2.3). Среднее расстояние между соседними маркерами варьирует от 2 сМ для хромосомы 21 до 5 сМ для самых крупных хромосом с очень небольшим числом участков в геноме с расстоянием между маркерами большим, чем 10 сМ. GDB содержит 672 гена, локали- зованных на картах сцепления индексных маркеров, из общего числа 3485 клонированных генов (Guapay et al., 1994). Соз- данные в последние годы достаточно подробные геномные карты сцепления молекулярных маркеров в масштабах 13, 0; 5,0 и да- же 2,9 сантиморганид; автоматизация процесса генотипирования маркерных микросателлитных (STR) аллелей; большое число уже картированных структурных генов, анонимных ДНК-последова- тельностей значительно упрощают и, главное, ускоряют процесс генетического картирования. Если в 1992г. в распоряжении иследователей было только 814 динуклеотидных полиморфных сайтов (Weissenbach et al.,1992), то уже к маю 1994 г. их число возросло до 3 300 (Guyapay et al.,1994) , а к концу года - до 5 000- 6 000 (Shmitt, Goodfellow, 1994). Столь же быстрыми темпами нарастает число молекулярных маркеров и в геноме лабораторных мышей (Service, 1994). По всей види- мости, человек и лабораторная мышь будут первыми млекопитаю- щими с полностью расшифрованными геномами. Картирование генов человека и выяснение первичной нук- леотидной последовательности человеческого генома составляют основные, взаимосвязанные задачи Международной программы "Геном Человека". Официально эта научная программа с участи- ем ведущих молекулярно-генетических лабораторий США, Запад- ной Европы, России и Японии оформилась в 1990г. Однако, за- долго до приобретения официального статуса, в этих странах проводились важные молекулярные исследования по изучению ге- нома человека и картированию его генов. История отечествен- ной программы началась в 1987г. Её инициатором и безусловным лидером в течение многих лет был академик А.А.Баев. По его настоянию в 1989г. она стала одной из ведущих Государствен- ных научно-технических программ СССР. Основные разделы этой программы как в России, так и во всем мире включают три главных направления научных исследований: 1. Картирование и секвенирование генома; 2. Структурно-функциональное изучение генома; 3. Медицинскую генетику и генотерапию (Баев,1990; 1994). Предполагалось, что основной раздел программы, касаю- щийся секвенирования всего генома, то есть выяснения первич- ной последовательности всей молекулы ДНК одной клетки чело- века длиной около 1,5 метров, состоящей из 3.5х10!9 нуклео- тидов, будет завершен уже к 2 005 году. Однако, серьезные технические усовершенствования этого трудоемкого процесса, его автоматизация и резкое снижение себестоимости (от 1$ США за один шаг в 1990г. до 0,2$ в 1995г.) позволяют надеяться, что эта гигантская молекула, несущая информацию о всей прог- рамме индивидуального развития человека и его эволюции будет полностью расшифрована уже к 2 000 году ! (Marshall, 1995). Естественно, что в итоге этой работы будут идентифици- рованы и все гены человека, то есть будет точно определено их число, взаиморасположение на генетической карте и струк- турно-функциональные особенности. Предполагается, что осу- ществление этого проекта, помимо колоссальных теоретических обобщений для фундаментальных наук, окажет огромное влияние на понимание патогенеза, предупреждение и лечение наследственных болезней, значительно ускорит исследование молекулярных механизмов, лежащих в основе развития очень многих моногенных нарушений, будет способствовать более эф- фективному поиску генетических основ мультифакториальных за- болеваний и наследственной предрасположенности к таким широ- ко распространенным болезням человека как атеросклероз, ише- мия сердца, психиатрические и онкологические заболевания. ГЛАВА X. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ МОНОГЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ. Раздел 10.1. Хромосомная локализация и принципы класси- фикации генов наследственных болезней. Раздел 8.1 Хромосомная локализация и принципы классифи- К настоящему времени на хромосомах человека картирова- но около 800 генов, мутации которых приводят к различным наследственным заболеваниям. Количество моногенных заболева- ний, для которых известна локализация контролирующего гена, еще больше и приближается к 950 за счет существования ал- лельных серий, то есть групп болезней, клинически сильно от- личающихся друг от друга, но обусловленных мутациями в одном и том же гене (см.Глава IV). Для всех этих заболеваний прин- ципиально возможна пренатальная диагностика с использованием косвенных методов молекулярного анализа (см.Главу VII). Более половины картированных генов клонировано и оха- рактеризовано методами молекулярного анализа. Для каждого из этих генов описаны мутантные варианты среди соответствующих групп больных, причем количество идентифицированных аллелей в разных генах может колебаться от одного до нескольких со- тен (см.ниже). Молекулярное генотипирование мутации позволя- ет проводить прямую пренатальную диагностику соответствующе- го наследственного заболевания в семьях высокого риска (см.Главу VII). Число генов наследственных болезней, локализованных на каждой хромосоме приведено на Рис. 10.1. В среднем, на каж- дой из них к 1995г. идентифицировано около 30 таких струк- турных генов. Обращает на себя внимание неравномерный харак- тер распределения этих генов. Так, хромосомы 1 и 2 имеют примерно одинаковые размеры (хромосома 2 даже несколько крупнее), однако, число уже картированных генов, связанных с наследственными заболеваниями, на хромосоме 1 в 3 раза мень- ше, чем на хромосоме 2. Наибольшее число таких генов (больше 100) картировано на Х-хромосоме. Это, по-видимому, можно объяснить гемизиготным проявлением мутаций генов Х-хромосомы в компаунде гоносом ХУ у мужчин. Вместе с тем, анализ приве- денных данных (Рис. 10.1) свидетельствует и о феномене раз- личной насыщенности разных хромосом структурными генами. На- ибольшая плотность структурных генов свойственна хромосомам 1, 3, 7, 9, 17, 22, Х. Значительно меньшая - хромосомам 2, 13, 18, 21, У (Antonarakis, 1994). Неслучайно, дисбаланс не- которых из хромосом 2-й группы часто совместим с постнаталь- ным развитием (синдром Дауна - трисомия 21; синдром Эдвардса - трисомия 18; синдром Патау - трисомия 13). По-видимому, это связано со сравнительно низкой плотностью структурных генов в этих хромосомах, а также с отсутствием в них генов, контролирующих ранние стадии развития. Напротив, сравнитель- но слабая насыщенность известными генами хромосом 2 и 15 в сочетании с редкостью их дисбаланса даже в абортном материа- ле, может рассматриваться в пользу наличия в этих хромосомах "ранних генов", контролирующих начальные стадии онтогенеза человека: гаметогенез, ранний эмбриогенез. Мутации таких ге- нов отметаются селекцией уже на этих ранних стадиях, а пото- му не обнаруживаются постнатально. Стремительный рост даных о генетической информации, заключенной в каждой хромосоме, распределении в ней структурных и регуляторных генов, их взаимодействии с надмолекулярными структурами хромосом (ге- терохроматином), межхромосомных взаимодействиях и феномене геномного импринтинга открывает широкие возможности на новом методическом и концептуальном уровне подойти к проблеме хро- мосомного (геномного) контроля ранних стадий развития чело- века - основной проблемы цитогенетики развития млекопитающих (Баранов, 1984; 1990; 1992; Dyban, Baranov, 1987). Другое положение, которое следует напомнить в вводной части этой главы касается специфичности мутационных повреж- дений каждого структурного гена. Как указывалось ранее (см.Глава V), несмотря на наличие общих закономерностей в мутационных процессах, спектр мутаций для каждого гена, рав- но как и сами структурные гены - уникальны. Причины этой уникальности кроются в особенностях первичной структуры ДНК каждого гена, в частности, обогащенности CG нуклеотидами, его размерах, наличии прямых и обращенных повторов, присутс- твии внутри гена ДНК последовательностей, гомологичных вне- генным участкам, что может приводть к нарушениям процессов рекомбинации в мейозе и.т.д. Для каждого идентифицированного гена, мутации которого приводят к наследственным заболевани- ям, разработаны эффективные методы молекулярной диагностики, как правило, направленные на генотипирование наиболее частых мутаций этого гена. Реже для этих же целей используется неп- рямой метод диагностики с помощью молекулярных маркеров (см.Глава YII). Цитогенетические карты представляют собой один из спо- собов однозначной и обьективной систематизации генов. Для практических целей медико-генетического консультирования и дифференциальной диагностики моногенных заболеваний подобная классификация не всегда удобна, так как при составлении карт генов никак не учитывается информация об особенностях коди- руемых генами продуктов или о фенотипическом проявлении му- тантных аллелей. В медицинскихх целях черезвычайно важно иметь представление о группах генов, кодирующих функциональ- но и структурно родственные белки, или контролирующие забо- левания со сходной клинической картиной. Однако, далеко не всегда классификация по клиническим параметрам может быть проведена однозначно по ряду причин. Во-первых, большое чис- ло моногенных наследственных заболеваний носит синдромальный характер и, зачастую, не удается выделить группу ведущих клинических симптомов. Во-вторых, многие болезни отличаются высоким уровнем фенотипической гетерогенности, связанной ли- бо со спецификой мутационных повреждений, либо с различиями в окружающих условиях и/или в генетическом фоне (см. Главу IV). Кроме того, многие болезни, вызванные мутациями в раз- ных генах, могут протекать сходным образом и, основываясь только на клинических симптомах, трудно провести дифференци- альную диагностику подобных заболеваний. Поэтому наиболее обьективная классификация моногенных наследственных болезней с известными первичными биохимическими дефектами проводится на основе классификации соответствующих генопродуктов с уче- том их участия в определенных метаболических циклах. В данной заключительной главе мы попытаемся проиллюст- рировать на ряде примеров теоретические положения, изложен- ные в предыдущих главах. В качестве примеров будут приведены краткие молекулярно-генетические характеристики некоторых классов хорошо изученных и достаточно распространенных моно- генных наследственных болезней. Большинство из этих завболе- ваний в той или иной мере изучаются в соответствующих науч- ных центрах России, а их диагностика в медико-генетических центрах страны проводится не только по клиническим парамет- рам, но и с обязательным учетом результатов молекулярного и/или биохимического обследования. Раздел 10.2. Метаболические дефекты лизосомных фермен- тов. Болезни накопления. В качестве примера наиболее полно и всесторонне изучен- ных заболеваний мы выбрали группу болезней, обусловленных наследственными дефектами лизосомальных гидролаз. В Табл. 10.1 представлены данные о наследовании и встречаемости ли- зосомных болезней, хромосомной локализации и структуре соот- ветствующих генов, кодируемых ими продуктах и идентифициро- ванных мутантных аллелях. Даны также ссылки на основные ра- боты по картированию соответствующих генов, их клонированию и идентификации мажорных (то есть наиболее частых) мутаций. Таблица составлена по материалам Каталога наследственных бо- лезней В. МакКьюсика 1994 г.(McKusik, 1994) и дополнена не- обходимыми литературными данными. Таблица 10.1 Молекулярно-генетические основы лизосомных болезней ( N) - примечания, представленные в конце таблицы). ---------------------T--------------T-----------------------T---------------- --------¬ Синдромы 1), номер по¦Встречаемость,¦Типы и количество му- ¦Литература ¦ МакКьюсику; хромосом-¦белок, размеры¦таций 5), мажорные мута¦(локализация и структура¦ ная локализация; ген ¦в аминокисло- ¦ции -в скобках указаны ¦генов,клонирование кДНК,¦ 2);размеры 3); экзоны¦тах 4) ¦частоты аллелей у б-ных¦идентификация мутаций). ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ N-ацетил-альфа-D-га- ¦Очень редко 6)¦Миссенс - 2: ¦Wang et al.,1990 ¦ лактозаминидазы деф.;¦ ¦E325K -Шиндлера болезнь¦Desnick, 1991 ¦ Шиндлера;Канзаки б-нь¦Ацетилгалактоз¦R329W - Канзаки болезнь¦ ¦ 104170; 22q11; ¦аминидаза,аль-¦ ¦ ¦ NAGA.2; кДНК-2.2 кб ¦фа-N-; 411¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Ангиокератома Фабри; ¦1 : 40 000 ¦Миссенс -31;делеции (от¦ Bishop et al.,1988 ¦ дистопический липидоз¦ ¦1 н. до неск.экз.) -11;¦ Kornreich et al.,1990 ¦ 301500; Xq22; ¦Галактозидаза ¦сплайс.-5 (из них 3 с ¦ Davies et al., 1993 ¦ GLA.50; 12 кб, 7 экз.¦альфа; 429¦дел.экз); инс.,дупл.-3 ¦ Eng et al.,1993 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Аспартилглюкозамину- ¦Более 100 случ¦Миссенс -5; делеции -4;¦Ikonen et al.,1991 ¦ рия, ¦в Финляндии ¦инсерции -2; ¦Ikonen et al.,1992 ¦ 208400; 4q23-q27; ¦Аспартилглюкоз¦C163S - мажорная мута- ¦ ¦ AGA.11; ¦аминидаза; 346¦ция в Финляндии (98%) ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Вольмана б-нь;гиперхо¦Более 70 случ.¦Делеция 72 н.,возникшая¦Anderson et al.,1991 ¦ лестерин-гипертригли-¦ ¦в результате сплайсинго¦Anderson et al.,1994 ¦ церидемия, ¦Лизосомальная ¦вой мутации -обнаружена¦Maslen et al,1993 ¦ 278000; 10q24-q25; ¦кислая липаза ¦в 2 случаях;миссенс -2;¦Klima et al.,1993 ¦ LIPA.4; 36 кб;10 экз.¦-A ¦инсерция 1 н. - 1. ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Галактосиалидоз, ¦Преим.в Японии¦Делеция экз.7 (сплайс.)¦Galjard et al.,1988 ¦ ¦Протективный ¦-мажорная у взрослsх в ¦Wiegant et al.,1991 ¦ 256540; 20q13.1; ¦белок бета га-¦Японии; миссенс -6; ¦Takano et al.,1991 ¦ PPGB.7; мРНК - 2 кб ¦лактозидазы452¦F412V - в 2 случаях ¦Zhou et al.,1991 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Ганглиозидоз GMI; му-¦Неизвестно ¦Миссенс -10; дуплик.-2;¦Oshima et al.,1988 ¦ кополисахаридоз 1YB, ¦ ¦I51T и R201C-мажорные в¦Noshimoto et al.,1991 ¦ 230500; 3p21.33; ¦Галактозидаза ¦в Японии, R482H и W273L¦Suzuki et. al.,1993 ¦ GLB1.12; кДНК - 2кб ¦бета-1; 677¦мажорные в Европе ¦Mosna et al.,1992 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Ганглиозидоз GM2-I, ¦1 : 300 000; у¦Миссенс-34;дел.-8;инс.-¦Proia et al.,1987 ¦ варианты B,B1 и псев-¦евреев 1:3 000¦2;сплайс.-8; Мажорные:у¦Myerowitz et al.,1988 ¦ до AB;Тея-Сакса б-знь¦Гексозаминида-¦евреев-инс.4 н.-70%,спл¦Arpaia et al.,1988 ¦ 272800; 15q23-q24; ¦за A, альфа ¦айс.-20%;G269S-взр.-20%¦Navon et al.,1989 ¦ HEXA.52; 35 кб, 14экз¦ 529¦не евреи - R247W - 32% ¦Triggs-Raine et al.,1992¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Ганглиозидоз GM2, тип¦1 : 300 000 ¦Миссенс -5; делеции -2;¦Proia: 1988 ¦ II,Зандхоффа болезнь,¦ ¦инсерции - 2; Мажорные:¦Neote et al.,1990 ¦ 268800; 5q13; ¦Гексозаминида-¦16-кб делеция 1-5 экз.-¦Wakamatusi et al.,1992 ¦ HEXB.9; 40 кб, 14экз.¦за B,бета; 556¦27%;делеция 50кб; P417K¦McInnes et al.,1992 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Ганглиозидоз-GM2, AB ¦Очень редко ¦Миссенс -3: C107R; ¦Heng et al.,1993 ¦ вариант, ¦ ¦R169P; C138R (1 пациент¦Schroder et al.,1993 ¦ 272750; q31.3-q33.1;¦GM2-активатор-¦гомозиготен) ¦ ¦ GM2A.3; ¦ный белок; 193¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Гоше болезнь; глико- ¦1:600 у евреев¦Миссенс -30;инс.-1;деле¦Sorge et al.,1985 ¦ сфинголипидоз, ¦изол. в Швеции¦ции-3;сплайс.-1; Мажор-¦Sorge et al.,1987 ¦ 230800; 1q21; ¦Глюкоцеребро- ¦ные (98%):N370S, L444P,¦Beutler et al.,1992 ¦ GBA.36; ¦зидаза; 644¦R463C,84insG;IVS2+1 G-A¦Horowitz et al.,1994 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Лейкодистрофия глобо-¦1 : 50 000 в ¦Нонсенс мутация:E369TER¦Zlotogora et al.,1990 ¦ ид-клеточная, Краббе,¦Швеции ¦ ¦Sakai et al.,1994 ¦ 245200; 14q21-q31; ¦Галактозилцера¦ ¦ ¦ GALC.1; кДНК -3.78 кб¦мидаза 669¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Лейкодистрофия ¦1 : 100 000 ¦Миссенс -7; делеции -2;¦Stein et al.,1989 ¦ метахроматическая, ¦ ¦сплайс. -2; регулят. -1¦Polten et al.,1991 ¦ 250100; 22q13.31-qter¦Арилсульфатаза¦Мажорные:P426L и сплайс¦ ¦ ARSA.12; 8 экз¦A 507¦2 -70%, регулят. - 1-2%¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Лейкодистрофия мета- ¦Редко ¦Миссенс -4: T23I,T216I,¦Rorman et al.,1992 ¦ хроматическая, SAP1 ¦ ¦C241S,F385C; ¦Wenger et al.,1989 ¦ деф.; Гоше б-нь, ¦ ¦инсерция 33 н. -1; ¦ ¦ 176801; 10q21-q22; ¦Просапозин ¦регуляторная мутация в ¦ ¦ PSAP.6; 20 кб, 13экз.¦ 511¦инициирующем кодоне -1 ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Лизосомальной кислой ¦ ¦ ¦Pohlmann et al.,1988 ¦ фосфатазы деф., ¦Кислая фосфата¦ ¦ ¦ 171650; 11p12-p11; ¦за 2, лизосом-¦ ¦ ¦ ACP2.; кДНК-2.1 кб ¦ная 423¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Липидоз сфингомиелино¦Редко ¦Миссенс - 8; делеции -3¦Quintern et al.,1989 ¦ вый;Ниманна-Пика бо- ¦ ¦Мажорные:тип A евреи: ¦Levran et al.,1991 ¦ лезнь,тип A/B, ¦ ¦R496L,L302P,дел.1н.P330¦Schuchman et al.,1992 ¦ 257200; 11p15.4-p15.1¦Сфингомиелина-¦в комплексе 65%; тип B ¦Suchi et al.,1992 ¦ ¦ SMPD1.11; ¦за 629¦Сев.Африка R608del->80%¦Takahashi et al.,1992 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Ниманна-Пика болезнь,¦Очень редко ¦ ¦Carstea et al.,1993 ¦ тип C, ¦ ¦ ¦Kurimasa et al,1993 ¦ 257220; 18p; ¦ ¦ ¦ ¦ NPC.; ¦ ¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Ниманна-Пика болезнь,¦Очень редко ¦ ¦Winsor et al.,1978 ¦ тип D, ¦ ¦ ¦ ¦ 257250; ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Маннозидоз, альфа B, ¦50-100 случаев¦ ¦Kaneda et al.,1987 ¦ лизосомальный, ¦Лизосомальная ¦ ¦ ¦ 248500; 19p13.2-q12;¦альфа-D-манно-¦ ¦ ¦ MANB.; ¦зидаза B ¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Маннозидоз, бета, ¦Очень редко ¦ ¦Lundin,1987 ¦ ¦Лизосомальная ¦ ¦ ¦ 248510; chr.4?; ¦бета маннози- ¦ ¦ ¦ MANB1.; ¦даза ¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ MASA синдром (сложная¦Редко ¦ ¦Schrander- Stumpel ¦ спастическая парапле-¦ ¦ ¦et al.,1990 ¦ ¦ гия), 303350; Xq28; ¦Маннозосвязыва¦ ¦Rosenthal et al.,1992 ¦ MASA.; ¦ющий лектин248¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз 1; ¦1:100 000, ¦Нонсенс -4; миссенс -3;¦Scott et al.,1991 ¦ Гурлера синдром;Шейе,¦1:600 000-Шейе¦сплайс. -1; дел. 1н. -1¦Scott et al.,1992 ¦ 252800; 4p16.3; ¦Альфа-L-идуро-¦Мажорные: W402X (31%), ¦Moskowitz et al.,1993 ¦ IDUA.9; 19 кб, 14экз.¦нидаза 653¦Q70X (15%), P533R (3%) ¦Scott et al.,1993 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз II;¦1:70 000 в Из-¦20% -крупные делеции,из¦Wilson et al.,1990 ¦ Хантера синдром, ¦раиле ¦них 4,5 % -всего гена; ¦Bunge et al.,1993 ¦ 309900; Xq28; ¦Идуронат-2- ¦делеции 1-3н-7;миссенс-¦Flomen et al.,1993 ¦ IDS.29; 24 кб, 9 экз.¦сульфатаза 550¦13;нонсенс -4;сплайс.-5¦Hopwood et al.,1993 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз ¦1 : 24 000 в ¦ ¦Kresse et al.,1971 ¦ IIIA,Санфилиппо синд-¦Нидерландах ¦ ¦ ¦ ром A, 252900; ¦(все типы A-D)¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз ¦Наиболее часто¦ ¦Pande et al.,1992 ¦ IIIB,Санфилиппо синд-¦на юге Европы ¦ ¦ ¦ ром B, 252920;Chr.17?¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз III¦Редко ¦ ¦Zaremba et al.,1992 ¦ C, Санфилиппо синдром¦ ¦ ¦ ¦ C, 252930;Chr.14 или ¦ ¦ ¦ ¦ 21?; ¦ ¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз III¦Редко ¦ ¦Robertson et al.,1988a ¦ Санфилиппо синдром D,¦N-ацитил-глюко¦ ¦Robertson et al.,1988b ¦ 252940; 12q14; ¦зоамин-6-суль ¦ ¦ ¦ GNS.; ¦фатаза 552¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз IYA¦1 : 300 000 ¦Миссенс - 3: N204K, ¦Tomatsu et al.,1991 ¦ Моркио синдром, ¦ ¦A138V, R386C; ¦Tomatsu et al.,1992 ¦ 253000; 16q24.3; ¦Галактозамин-6¦делеция 2 н. - 1 ¦Masuno et al.,1993 ¦ GALNS.4; ¦сульфатаза 522¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз YI;¦Редко ¦Миссенс - 4: C137V, ¦Litjens et al., 1989 ¦ Марото-Лами синдром, ¦ ¦C117R, L236P, C405Y; ¦Schuchman et al.,1990 ¦ 253200; 5q11-q13; ¦Арилсульфатаза¦делеция 1н. - 1 ¦Jin et al.,1992 ¦ ARSB.5; ¦B 533¦ ¦Litjens et al., 1992 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Мукополисахаридоз YII¦Очень редко ¦Миссенс - 5: A619V, ¦Guise et al.,1985 ¦ Слая синдром, ¦ ¦R382C, R216W, R354W, ¦Oshima et al., 1987 ¦ 253220, 7q21.11; ¦Бета-глюкуро- ¦R611W ¦Miller et al.,1990 ¦ GUSB.5; 21 кб, 12экз.¦нидаза 651¦ ¦Tomatsu et al.,1991 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Сиалидоз типы I и II;¦50-100 случаев¦ ¦Oohira et al.,1986 ¦ липомукополисахаридоз¦ ¦ ¦Klein et al.,1986 ¦ 256550; 6p21.3; ¦Нейраминида- ¦ ¦Sasagasako et al.,1993 ¦ NEU.; ¦за-1 ¦ ¦ ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------+ Фукозидоз, ¦30-60 случаев ¦Нонсенс - 5:Q351X-мажор¦Fowler et al.,1986 ¦ ¦Фукозидаза аль¦ная (20%), E375X, Q77X,¦Kretz et al.,1992 ¦ 230000; 1p34; ¦фа-L-1,ткане- ¦W382X, Y211X;делеции -4¦Roychoudhuri et al.,1988¦ FUCA1.10; 23 кб, 8экз¦вая 461¦(экз2-1,1н-3);сплайс.-1¦Seo et al.,1993 ¦ ---------------------+--------------+-----------------------+---------------- --------- 1) - через ";" указаны различные наименования болезней либо аллельные варианты 2) - после наименования гена через "." указано количество идентифицированных мутантных аллелей к июлю 1994г. 3) - размеры генов указаны в килобазах (кб), иногда вместо размеров гена указаны размеры кДНК или мРНК 4) - размеры белка указаны в правом нижнем углу |
|
© 2010 |
|